大腸桿菌DH5α化學感受態細胞由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多大腸桿菌DH5α化學感受態細胞等克隆與表達產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括大腸桿菌DH5α化學感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：大腸桿菌DH5α化學感受態細胞
英文名稱：E.coli DH5α Chemical Competent Cell
產品貨號：BTN81024
產品規格：0.1mL*10

 本產品是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。DH5α是一種常用于質粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因產物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。使用pUC19質粒檢測，轉化效率不低于107，適用于的質粒DNA克隆并能保證高拷貝質粒的穩定復制。
 本菌種來源于Hoffman-Berling 1100菌種。

基因型	表現型
deo R	組成型合成脫氧核糖
end A1	核酸內切酶I缺失
gyr A96	具有萘啶酮酸抗性
hsd R17	限制性酶EcoK缺失
△(lac)U169	lac基因缺失
rec A1	DNA重組活性降低
Rel A1	允許在無蛋白質合成時有RNA合成
sup E44	抑制琥珀突變突變，為某些噬菌體必需
thi-1	不能自身合成硫氨
φ80(lac ZΔM15)	提供α-互補所需的ω片斷

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入800μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，200rpm(小于225rpm)振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。
注意事項：
1、涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm ，2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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貨號	名稱	規格
BTN130803	pression/BTN130803.html" target="_blank">單細胞裂解液(DNA提取)	1mL
BTN130805	pression/BTN130805.html" target="_blank">單細胞懸浮液	1mL
BTN140218	pression/BTN140218.html" target="_blank">大腸桿菌DB3.1化學感受態細胞	10*100μl
BTN90504	pression/BTN90504.html" target="_blank">大腸桿菌XL1-Blue化學感受態細胞	0.1mL*10
BTN120692	pression/BTN120692.html" target="_blank">硫酸慶大霉素	2mL
YT475	pression/YT475.html" target="_blank">N端DsRed標簽融合蛋白質粒(紅色熒光蛋白)	1μg
YT476	pression/YT476.html" target="_blank">N端EGFP標簽融合蛋白質粒(綠色熒光蛋白)	1μg

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名稱：DNA磷酸化試劑盒
貨號：BTN130813
規格：20次
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基團而不是-PO4基團(除非額外付費要求在人工合成時加上-PO4基團)，而任何DNA連接酶都不能將一個DNA分子5′端的-OH基團和另一個DNA分子3′端的-OH基團進行連接，因此通過人工合成的DNA片段和天然DNA 之間的連接效率一般都比天然DNA 彼此的連接效率低(天然DNA 4個端口均可連接，人工合成的DNA跟天然DNA 有2個端口可以連接，人工合成的DNA之間沒有任何端口可以連接)，尤其是在平末端連接時。本公司開發的DNA 磷酸化產品能將DNA分子5′端的-OH基團磷酸化。

產品特點：
1.可以快速把DNA的5′端的-OH基團變成-PO4基團，使人工合成的DNA(包括PCR產物)跟天然DNA一樣有高的連接效率。
2. 既可以對單鏈DNA進行磷酸化處理，也可以對雙鏈DNA片段同時磷酸化處理。
3.處理后的DNA可以直接用于連接反應、克隆等，不需要純化。
4. 本產品足夠20次DNA的磷酸化實驗。

成分	規格
10×TPK緩沖液	50μl
ATP溶液(10mM)	100μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為6個月。

使用方法：

一：雙鏈DNA片段(5′端為-OH基團的)的磷酸化
注意：如果是PCR產物，一定要先膠回收，不能使用沒經過純化的PCR反應液，因為其中的殘留PCR引物會耗掉大量的激酶，降低PCR產物的磷酸化效率。
1、在微量離心管中配制下列反應液(20μL)：

成分	用量
PCR膠回收片段	2μL(不超過10pmol)
10×TPK緩沖液	2μl
ATP溶液(10mM)	5μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超純水到	20μl

2、37℃反應30分鐘。
3、70℃熱處理5分鐘，滅活酶。
4、可直接用于后續克隆(加入量不要超過總體積的1/5)。

二：單鏈DNA片段的磷酸化
注：單鏈DNA 包括局部雙鏈的DNA。引物，linker，adaptor，Oligo探針等均按此操作處理。
5、在微量離心管中配制下列反應液(20μL)：

成分	用量
單鏈DNA片段	5-10 pmol
10×TPK緩沖液	2μl
ATP溶液(10mM)	1μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超純水到	20μl

6、37℃反應30分鐘。
7、70℃熱處理5分鐘，滅活激酶。
8、可直接用于后續克隆(加入量不要超過總體積的1/5)。如果使用濃度高，則可能需要乙醇沉淀法濃縮DNA。如果單鏈DNA的濃度低于5pmol，還需要在乙醇沉淀時加入核酸助沉劑。沉淀得到的DNA可溶解在適量的水中。

附：乙醇沉淀濃度DNA(本試劑盒不提供相關試劑，下列操作僅供參考：
1、在DNA溶液中加入0.1倍體積的3 M 乙酸鈉溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍體積的無水乙醇和4uL 核酸助沉劑。
3、混勻后12000g 4℃離心10分鐘，小心棄上清。
4、加入1mL 70%乙醇，短暫離心3分鐘后小心棄上清。
5、短暫離心5秒，吸棄殘留液體(約30-50μL)。
6、室溫放置2分鐘干燥后加入適量的超純水溶解DNA，立即使用或放-20℃長期保存。

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