QN1237 1×TBST緩沖液

產品簡介
1×TBST緩沖液由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持,本品用于科研目的,本產品質量好,且具價格,深為用戶稱道,了解更多1×TBST緩沖液等蛋白質研究產品請聯系我司咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括1×TBST緩沖液在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:1×TBST緩沖液
英文名稱:TBST,1×
產品貨號:QN1237
產品規格:500ml
TBST緩沖液是生物學中常使用的等滲緩沖鹽溶液,主要用于 Western Blot 實驗中洗去膜上非特異性結合 的抗體等試劑。由 Tris-HCl 構成穩定的 PH 緩沖體系,NaCl 提供等滲條件,Tween-20 作為去污劑可增加緩沖液 的洗脫能力。 本產品為 1×工作液,可直接使用,用后請及時擰緊瓶蓋,以防揮發。4℃保存可延長產品保質期,長期不 用建議低溫保存。若產品出現結晶析出,請置于 37℃水浴至完全溶解。
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| 貨號 | 名稱 | 規格 |
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| SNM420 | 定影粉 | 10×250ml |
| SNM421 | 顯影粉 | 10×250ml |
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名稱:膽酸鈉
貨號:BTN131048
規格:5g
本產品用于制備脂質體和分離脂質。HPLC測定其純度>99%。低紫外吸收(1%溶液的A280<0.08)。可以重生固定化的多粘菌素B 親和柱。
儲存條件:常溫運輸和保存,有效期一年。
名稱:蛋白濃度測定試劑盒(Bradford法)
貨號:YT034
規格:1000次
本試劑盒是根據zuì常用的兩種蛋白濃度檢測方法之一Bradford法研制而成,實現了蛋白濃度測定的快速,穩定和高靈敏度。
本試劑盒檢測速度快,10-20個樣品只需不足10分鐘即可完成。靈敏度高,檢測濃度下限達到25μg/ml,zuì小檢測蛋白量達到0.5μg,待測樣品體積為1-20μl。在50-1000μg/ml濃度范圍內有較好的線性關系。
Bradford法測定蛋白濃度不受大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20,60,80低于0.015%。含去垢劑的樣品推薦使用百奧萊博的BCA蛋白濃度測定試劑盒(YT037)。
試劑盒組份:
G250染色液——————————100ml×2
蛋白標準(5mg/ml BSA)—————1ml
儲存條件:4℃,有效期9個月。(BSA需-20℃保存)
名稱:RIPA裂解液(強)
貨號:WE0258
規格:100ml
RIPA裂解液是一種傳統的組織以及細胞快速裂解液,主要用于從動物組織和哺乳動物細胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解貼壁細胞和懸浮細胞。按照其裂解液的強度可以分為強、中、弱三類,具體特點和差異請參考附表2,可根據實驗需求選擇相應產品。RIPA裂解液(強)可以有效提取細胞核、細胞膜和胞漿蛋白,提取的蛋白可應用于蛋白定量、Western Blot、IP等檢測分析。
RIPA裂解液(強)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1%Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等。
注意事項:
1、為防止蛋白降解,所有的操作盡量在冰上進行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品,可采用BCA法進行蛋白定量,以測定蛋白濃度。產品可單獨向本公司訂購,如:WE0276 BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的去垢劑,不能用Bradford法進行蛋白定量。
3、建議在使用RIPA裂解液前,向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,以防止蛋白降解,或保持蛋白的磷酸化狀態。產品可單獨向本公司訂購,如:WE0259 蛋白酶抑制劑混合物,WE0256 磷酸酶抑制劑混合物。
4、若需獲得更高濃度的蛋白,應減少哺乳動物蛋白抽提試劑的使用量。
5、對于培養瓶中的貼壁細胞,推薦先使用常規方法消化細胞,再參考懸浮細胞蛋白提取步驟操作。
6、對于離心獲得的細胞,若不確定細胞體積,可根據細胞數量計算RIPA裂解液的使用量。如5×106個Hela細胞約需加入500μl RIPA裂解液,以此類推。
使用方法:
一、細胞樣品
貼壁細胞蛋白抽提
1、小心傾去貼壁細胞的培養液。
2、可選步驟:若培養基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質,請先使用預冷的PBS漂洗細胞。
3.加入適量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑),試劑使用量請參考附表1,在冰上用槍頭吹打貼壁細胞。
表1 貼壁細胞RIPA 裂解液使用量推薦表
| 細胞培養板類型或培養面積 | RIPA 裂解液使用量 |
| 100 mm | 500-1000μl |
| 60 mm | 250-500μl |
| 6孔培養板 | 200-400μl /孔 |
| 24孔培養板 | 100-200μl /孔 |
| 96孔培養板 | 50-100μl /孔 |
4、將裂解液轉移至新的離心管中,冰上孵育20分鐘,使細胞充分裂解。
5、14000×g離心10分鐘。轉移上清液至新管中,進行下一步分析。
懸浮細胞蛋白提取
1、懸浮細胞,2,500×g離心5分鐘,棄去上清。
2、可選步驟:若培養基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質,請使用PBS漂洗細胞。漂洗后的細胞懸浮液2,500×g離心5分鐘,棄去上清。
3、加入適量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑),每5×106細胞加入約200-500μl RIPA Lysis Buffer(Strong),吹打均勻。
4、冰上放置20分鐘,使細胞充分裂解。
5、14000×g離心10分鐘。轉移上清液至新管中,進行下一步分析。
二、組織樣品
1、取適當的RIPA Lysis Buffer(Strong),在使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑。
2、稱量實驗組織的重量,按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Strong)后將組織剪成細小碎片,用電動勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物,可適當減少組織蛋白抽提試劑使用量。
3、冰上孵育20分鐘,使細胞充分裂解。
4、14000×g 離心10分鐘。轉移上清液至新管中,進行下一步分析。
注:RIPA裂解液的裂解產物中可能會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為基因組。
表2 蛋白裂解液性能、參數比較
| 目錄號 | WE0258 | WE0257 | ||
| 名稱 | RIPA裂解液(強) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) | SDS裂解液 |
| 裂解強度 | 強 | 中 | 溫和 | 強 |
| 有效裂解成分 |
1%Triton X-100, 1%脫氧膽酸鈉, 0.1% SDS |
1% NP-40, 0.5%脫氧膽酸鈉 , 0.1% SDS |
1% NP-40, 0.25%脫氧膽酸鈉 | 1%SDS |
| 膜蛋白提取 | 很好 | 較好 | 一般 | 很好 |
| 胞漿蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 核蛋白提取 | 很好 | 較好 | 較好 | 很好 |
| 主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP,CO-IP | WB,CHIP |
儲存條件:2~8℃
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