三合一RNA上樣液(A型,6X)是高品質的核酸電泳和回收產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多三合一RNA上樣液(A型,6X)等核酸電泳和回收產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括三合一RNA上樣液(A型,6X)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：三合一RNA上樣液(A型,6X)
英文名稱：RNA Loading Buffer
產品貨號：BTN3130A
產品規格：1.5mL

本品是集RNA變性RNA、上樣、RNA染色三種功能于一體的即用型溶液。

產品特點：
1．能提高RNA上樣速度，免去繁瑣的準備步驟，減少污染。
2．其含有的RNase抑制劑能抑制RNA樣品中殘留RNase的活性，保證電泳過程中RNA的完整性。
3．所含甘油和染料(僅BTN3130A含EB染料)，便于直接上樣和UV觀察RNA電泳條帶，免去染色和脫色過程。
4．本產品與DNA/RNA兩用快速電泳液SuperBuffer-2完全兼容。

產品組成：

成分	規格
三合一RNA上樣液	1.5ml
說明書	1份

本產品為紅色液體，含紅色的EB(溴化乙錠)，有致癌性，避免用手直接接觸。
另一紅色電泳示蹤劑的電泳速度相當于50nt的RNA。

儲存條件：常溫運輸，4℃(短期)或-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按1:1-1:3的比例將RNA樣品與RNA上樣液混合(如5μL RNA+15μL RNA上樣液)。
2. 65-85℃水浴保溫10分鐘,。
3. 冰浴5分鐘后即可直接上樣電泳。
 注：本產品含EB，所以瓊脂糖凝膠中可以不必再加EB。本產品與甲醛瓊脂糖變性凝膠或用DNA/RNA兩用快速電泳液SuperBuffer-2配制的非變性瓊脂糖變性凝膠兼容。
4.電泳完畢后可直接將凝膠放在紫外燈下觀察結果，RNA 條帶成紅色。

疑難解答：
Q：為何RNA樣品在甲醛變性膠中的電泳效果比普通非變性膠差?
A：這是因為在非變性膠中，即使內部有切口的RNA分子(實際已經是兩條RNA分子)也會通過形成發夾結構而跟完整的分子等速電泳，而在變性膠中，完整RNA分子和內部有切口的RNA分子將以不同的速度泳動，所以變性膠看起來效果不好是反應了真實情況，非變性膠看起來好只是一種假象。要求嚴格的實驗(如CDNA文庫構建)zuì好還是使用甲醛變性膠判斷RNA的質量好壞。

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BTN90313 TBE電泳液，10× 250mL
BTN70503X DNA marker(100-1500bp) 50次
BTN90602B DNA marker(pBR322/MspI) 50次
BTN100882 溴酚藍溶液(電泳級) 10mL
BTN90308 親和硅烷 25mL
WE0211 6×UltraStain上樣緩沖液 500μl|500μl×5
RFT191 50×TAE 500ml|10×500ml

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名稱：一站式miRNA尿素-PAGE電泳套裝
貨號：BTN70606
規格：30次
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離200nt以下的小片段RNA，尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨配制各種溶液十分繁瑣，為此我們公司開發了本產品。

產品特點：
1.一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開即用，十分方便，免去了實驗人員稱取有毒物品。
2. 靈活，可以根據需要配制各種濃度的Urea-PAGE，以便對長度各異的RNA進行電泳。
3.電泳后可直接用于UV觀察、銀染、膠回收、Northern雜交和放射自顯影等。
4. 使用緩沖液，可以防止甘油的干擾。

產品組成：

成分	規格
尿素	210g
丙烯酰胺	60g
甲叉雙丙烯酰胺	3g
TBE電泳液，10×	250ml
TEMED	1.5ml
過硫酸銨(干粉)	1g
miRNAload	10ml
miRNA Marker	30次
固相RNase清除劑	100ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸、4℃保存(miRNAload、miRNA Marker需要-20℃保存)。保存期為一年。

使用方法：

一、準備工作
1. 用固相RNase清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。
2. 配制1 X電泳緩沖液：將適量的10X電泳緩沖液用RNase-free水稀釋10倍，得到1X電泳緩沖液待用。
3. 配制10%過硫酸銨溶液：稱取約100mg過硫酸銨到一干凈的1.5mL離心管中，按每1mg過硫酸銨加10μl RNase-free水的比例加入RNase-free水，搖晃致溶，立即使用。注意：放置時間不要超過一周。

二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊13cm×15cm×0.8mm的膠需要15mL凝膠溶液，配制一塊36cm×45cm×0.8 mm的膠需要120mL凝膠溶液。
2. 根據所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分(此處以配制100mL濃度為15%的凝膠為例):

成分	終濃度	用量
尿素	7M	42g
40% Acrylamide/Bis溶液	15%	37.5mL
10×電泳緩沖液	1×	10ml
補RNase-free水到100mL

注：Acrylamide/Bis的終濃度需要根據待分離RNA長度選擇(見下表)。

需分離的RNA長度范圍	Acrylamide/Bis工作濃度
6-100nt	20%
25-150nt	15%
40-200nt	12%
60-400nt	8%
80-500nt	5%
1000-2000nt	3.5%

3. 攪拌并加熱到40-50℃左右，直到尿素完全溶解。
4. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統抽真空處理10-15分鐘以充分去除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應效率)。但如果實驗條件有限，此步也可以省略。
5. 邊搖晃溶液變加入50μl TEMED和500μl 10%過硫酸銨。注意：即使選擇其他工作濃度的Acrylamide/Bis，TEMED和10%過硫酸銨的用量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED和10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
6. 再充分搖晃約30秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
7.室溫放置30-60分鐘使膠凝固。
8. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當量的1×電泳緩沖液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
9. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個加樣空中未聚合的Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。

三、電泳
1.在上樣前，預電泳 20-30分鐘以使多余的過硫酸銨跑出加樣空，同時還可以使凝膠的溫度升高(到 50℃左右)，有利于RNA電泳時維持在變性狀態。預電泳電流見下面第 5 條。
2. 將miRNA樣品與等體積的miRNAload 混合，70℃保溫 2-3分鐘后迅速放置在冰上冷卻，快速離心半分鐘，放冰上待用。
3. 關電泳儀后開始上樣。注意：每次上樣后如果不更換槍頭，則需要充分吹打洗凈槍頭以防樣品的交叉污染。
4. 同時上樣 miRNA Marker。
5. 重開電泳儀，對 13cm×15 cm的膠，以20-30mA的電流電泳，直到紅色染料移動到凝膠邊緣為止；對 36cm×45cm的膠，則以50-60mA的電流電泳，直到紅色染料移動到凝膠邊緣為止。

四、后續處理
1.染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開，直接用仍然附著在另一玻璃板上的凝膠進行各種染色，包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每100mL 1×TBE中加 20μL 10mg/mL的EB溶液)、我們公司低毒核酸染料 DNAgreen(每100mL 1×TBE中加10μL DNAgreen 原液)。UV下觀察并拍照。
2. miRNA回收：按上法用EB等染料染色后，UV下確定所需要的miRNA條帶的位置，切膠后進行膠回收處理。
3. Northern雜交：按上法用EB等染料染色后，UV下確定所需要的miRNA條帶的位置，切膠后電轉移到帶正電的尼龍膜上，然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果miRNA樣品電泳前經過同位素標記，則將凝膠一面的玻璃板揭開，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來，然后包上保鮮膜，真空抽干，然后使膠跟X光片向對置進行放射自顯影。

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