一站式GST標記蛋白質微量純化套由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多一站式GST標記蛋白質微量純化套等蛋白質研究產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括一站式GST標記蛋白質微量純化套裝(含溶菌酶和核酸酶)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：一站式GST標記蛋白質微量純化套裝(含溶菌酶和核酸酶)
英文名稱：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(B)
產品貨號：BTN111116B
產品規格：20次

重組蛋白N端的GST谷胱甘肽S轉移酶能提高重組蛋白的水溶性，所以常用于蛋白質重組表達。GST-谷胱甘肽親和層析是利用GST 標記的蛋白能與谷胱甘肽層析介質結合，并能被還原型谷胱甘肽洗脫的特點而建立，是目前分離純化GST 標記蛋白質的重要方法。本產品就是專門用于上述目的，其原理如下：


產品特點：
1．一站式套裝，含所需的谷胱甘肽介質、溶液和層析柱，用戶只需要提供表達GST 標記蛋白的細菌(酵母、桿狀病毒、培養細胞)即可，非常方便。
2．專一性強，一次過柱即可獲得純度高達95%的GST-標記蛋白。
3．只能在非變性條件下使用，只可用于純化沒形成包涵體的GST 標記蛋白。
4．每次可以處理20mL的表達菌液，適合初步篩選和鑒定。
5．提供4mL濃度為50%的谷胱甘肽-Agarose 介質，可吸附5-10mg GST 標記蛋白質。
6．本介質可以反復使用多次。

試劑盒組成：

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介質,50%	4ml	4ml
10×PBS緩沖液	100ml	100ml
溶液A	1ml	無
GST洗脫緩沖液成分一	25ml	25ml
GST洗脫緩沖液成分二	約80mg	約80mg
溶菌酶(20KU/mg)	無	30mg
Benzonase(2U/μL)	無	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL層析柱(帶篩板)	1套	1套
說明書	1份	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低溫運輸。收到貨后，介質需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的樣品zuì好都留存少量作為SDS-PAGE分析的對照，在下面描述中就不再提醒。
2．本實驗需要用到的1×PBS緩沖液可用自備的超純水稀釋本試劑盒提供的10×PBS緩沖液而得。PBS緩沖液用超純水稀釋后其容易長細菌，注意防止污染。
3．GST 洗脫液的配制方法是將約80mg GST 洗脫液成分二干粉全部加入到GST 洗脫液成分一溶液中，搖晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脫液，分裝成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重組蛋白的表達和細菌收集
1．37℃振蕩培養20mL含表達質粒的細菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到終濃度為0.1mM，30℃振蕩培養3小時或22℃振蕩培養8小時(或過夜)。
3．4℃ 5000g離心10分鐘收集20mL表達菌液，棄上清。
4．用1×PBS緩沖液重懸細菌沉淀，4℃ 5000g離心10分鐘，棄上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、細胞裂解
5．如果用本產品A型，用1mL冰浴的新鮮配制的細胞裂解液(1mL 1×PBS緩沖液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重懸細菌沉淀，冰上超聲裂解菌體直到在顯微鏡下看見大多數細胞破裂。超聲參數需根據儀器型號自行摸索，一般選1K-10K 頻率處理15次，每次20秒，間隔1分鐘(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否則會堵塞層析柱。
6．如果用本產品B型，在1mL冰浴的新鮮配制的細胞裂解液(在20mL 1×PBS緩沖液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分裝成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重懸細菌沉淀后冰上放置30分鐘，得到細菌裂解物。
7．將超聲或酶法細胞裂解物在13000 g 4℃離心10分鐘去除未裂解細胞和裂解細胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 標記蛋白。

三、層析柱的制備和GST蛋白純化
8．搖晃將谷胱甘肽-Agarose 介質充分混勻后，取適量加入到預放了一片篩板的層析柱中(介質用量需要根據GST蛋白產量決定，100mL菌液一般使用200μL介質即可)。下列步驟各溶液的用量均針對200μL介質而定，如果介質用量不同，各溶液用量需相應調整。
9．用5mL預冷的1×PBS緩沖液洗柱。
10．將第7 步得到的上清液(含可溶性GST標記蛋白)上柱，讓重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE電泳。GST和谷胱甘肽之間的結合很緩慢，所以流速一定不能快，否則結合不充分。流速一般在0.2-1mL/分鐘即可。如要提高GST 標記蛋白與介質的結合效率，可用本試劑盒提供的紅蓋將層析柱下的漏液口堵上，讓細菌裂解液和介質在4℃結合30分鐘或過夜。也可以將穿透液反復上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS緩沖液洗柱，收集并保存穿透液(含雜蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脫液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 標記蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后續處理(如濃度測定或SDS-PAGE電泳)或-80℃長期放置。
13．對收集的2種穿透液和洗脫液進行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不預先脫鹽，則只能用Bradford法或OD 檢測法(1 OD280 約等于0.5mg/mL蛋白)測定穿透液和洗脫液的蛋白濃度。由于GST的分子量為26 KD，所以在SDS-PAGE膠上，GST 標記蛋白將比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢復(本試劑盒不含所需試劑)
1．用3倍體積的6M鹽酸胍處理柱子10分鐘。
2．用3倍體積的超純水處理柱子10分鐘。
3．用3倍體積的緩沖液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)處理柱子10分鐘。
4．用3倍體積的緩沖液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)處理柱子10分鐘。
5．再重復3-4 步兩次。
6．用3倍體積的超純水處理柱子3次。
7．用3倍體積的1×PBS緩沖液處理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍體積的1×PBS緩沖液待用。若長時間不用，則第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

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貨號	名稱	規格
BTN130886	植物線粒體總蛋白提取試劑盒	50次
YT619	SDS-PAGE電泳液	1L|10×1L
YT628	蛋白質Ladder(10-200kD)	100μl
WE0256	蛋白磷酸酶抑制劑混合物	1ml
WE0267	His標簽蛋白純化試劑盒(可溶性蛋白)	5ml
WE0312	PBS(pH7.5,10×)	500ml
SNM397	過硫酸銨(粉劑)	100g

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名稱：蛋白標準溶液BSA
貨號：WE0274
規格：5ml

名稱：高分子量蛋白Marker(43～200KD)
貨號：RFT049
規格：20T(100μl)
本產品包含5種蛋白質混合物，分子量范圍為43kD-200kD，經過SDS-PAGE電泳，用考馬斯亮藍染色后可以得到分布均勻密度相近的5條帶，可以用來判斷SDS-PAGE電泳后蛋白質的分子量。



使用說明：
1、取Marker樣品室溫融化，徹底混勻，離心快甩將樣品收集到管底。

2、95℃處理5分鐘后立即上樣電泳。
注：
a.一次熱處理后，未用盡樣品-20℃保存；下次使用時只要室溫完全融化混勻后即可上樣，不用再加熱處理。
b.上樣量根據膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來，0.75mm×5mm(厚度×寬度)的加樣孔上樣5μl，其他規格梳子請適當調整上樣量。

3、電泳結束后，染色，觀察結果。

注：使用銀染時，由于靈敏度高于考馬斯亮藍染色方法，可以適當降低Marker上樣量。

儲存條件：-20℃，有效期6個月。

名稱：一步法免疫組化試劑盒(兔、鼠通用)
貨號：KFS028
規格：300 片
本試劑盒可用于免疫組織化學方法以顯示抗原的分布。適用于常規福爾馬林固定石蠟包埋切片、冰凍切片、培養固定的細胞涂片，以及新鮮制備的血涂片等。我司即用型一步法免疫組化檢測試劑盒與常規免疫組化染色試劑盒相比，具有高靈敏性、高特異性及操作簡便的優點。多個HRP聚合物直接與二抗相連，大大放大了抗原抗體結合的信號，減少了孵育步驟，孵育時間縮短為10分鐘。試劑盒不含有生物素，完全避免了內源性生物素造成的背景影響。試劑盒提供的DAB顯色試劑為增強型顯色試劑，且自帶稀釋液，避免了由于水質的不同對DAB顯色造成的影響；與一般DAB試劑相比，增強型的穩定性顯著提高，顯色更醒目，敏感性更高。

注意事項：
1. 檢測標本時需同時做陰性對照和陽性對照。
2. DAB 是一潛在致癌物，使用時請注意自我防護。
3. DAB 顯色液需現用現配，避光放置，且在30 分鐘內染色。
4. 用滴瓶加液時，每一滴的體積為50μL。

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