北京百奧萊博供應的蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)用于科研試驗，我公司專注于蛋白質研究產品的研發、生產和供應，為您提供的蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)
英文名稱：The protein sample buffer
產品貨號：SNM452
產品規格：10ml



根據您的關注的蛋白上樣緩沖液(非還原，5X)，您可能還對以下產品有需求：



名稱：Ni瓊脂糖凝膠
貨號：WE0272
規格：10ml
  該鎳柱純化系統對6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力，能夠一步純化帶有6個組氨酸親和標簽的蛋白。該系統具有4個Ni2+螯合位點，較只有3個螯合位點的Ni-IDA結合Ni2+更為牢固，有效防止純化過程中Ni2+脫落且增強對His標簽蛋白的結合能力，提高純化效率。較高的基團密度，大大提高了蛋白載量。該系統在天然或變性條件下，對來源于各種表達系統(如桿狀病毒，哺乳細胞，酵母以及細菌)中的His標簽蛋白，均有很好的純化效果。本產品已螯合鎳離子，可直接使用，方便，快捷。

支持物：CL-6B瓊脂糖凝膠
載量：20-30 mg His標簽蛋白/ml填料
粒徑：50-160μM

注意事項：
1、緩沖液中不建議使用 β-巰基乙醇、DTT或EDTA。
2、整個純化過程中切忌凝膠脫水變干。
3、為提高純化效率，先確定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的zuì佳使用濃度?？梢允褂镁€性或梯度濃度的咪唑(20-500 mM)洗脫蛋白，并通過SDS-PAGE或Western Blotting來檢測目的蛋白的純度。
4、為避免柱子被堵塞，請使用高純度的試劑配制緩沖液，并通過0.45μM過濾器過濾。建議將裂解液進行離心，或者使用0.45μM過濾器過濾。
5、柱再生時，保證每步洗完后都要用足夠的去離子水沖洗至中性。

使用方法：

I 緩沖液的準備
1、可溶性蛋白純化緩沖液配方：

成分	Tris-HCl(PH 7.9)	咪唑	氯化鈉
Soluble Binding Buffer	20 mM	10 mM	0.5 M
Soluble Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M

2、包涵體蛋白純化緩沖液配方：

成分	Tris-HCl(PH 7.9)	咪唑	氯化鈉	尿素/鹽酸胍
Inclusion Body Binding Buffer	20 mM	5 mM	0.5 M	8 M/6 M
Inclusion Body Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M	8 M/6 M

II 組裝層析柱
1、將Ni-Agarose Resin填料混勻后加入層析柱，室溫靜置10分鐘，待凝膠與溶液分層后，把底部的出液口打開，讓乙醇通過重力作用緩慢流出。
注意：
1)填料的上層是乙醇保護層，將填料和乙醇一起混勻，以每ml填料純化20-30mg His標簽蛋白計算，取需要的填料與乙醇的混合液加入層析柱。
2)本實驗是通過重力作用使溶液流出，如果溶液不流出，可以給柱子一個外力，例如用大拇指對柱口輕輕按壓一下，迫使其流出。
2、向裝填好的柱中加入5倍柱體積的去離子水將乙醇沖洗干凈后，再用10倍柱體積的Binding Buffer平衡柱子，平衡結束后即可上樣。
注意：柱體積指的是填料的體積。

III 可溶性蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入1-5ml細菌裂解液，超聲裂解菌體。10000×g離心10分鐘后，收集上清。
2、將上清液過柱，流速為10倍柱體積/小時。
3、使用15倍柱體積的Soluble Binding Buffer沖洗柱子，收集流穿峰。
4、使用5倍柱體積的Soluble Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
5、洗脫后，依次使用3倍柱體積的Soluble Binding Buffer和5倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。

Ⅳ 包涵體蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入1-5ml 細菌裂解液，超聲裂解菌體。
2、離心，棄上清，將沉淀重懸于Soluble Binding Buffer 中(如有需要，可進行超聲波處理，超聲前可加入1-5 mM 磷酸酶抑制劑混合物)。
3、重復操作2，直至包涵體清洗干凈(呈較潔凈的乳白色狀)。
4、將沉淀重懸于Inclusion Body Binding Buffer中，冰浴1小時，使包涵體溶解。
5、10000×g離心20分鐘，將上清以孔徑為0.45μM的濾膜過濾。
6、將蛋白溶液負載上柱，流速為10倍柱體積/小時。
7、使用15倍柱體積的Inclusion Body Binding Buffer沖洗柱子，收集流穿峰。
8、使用5倍柱體積的Inclusion Body Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
9、洗脫后，依次使用3倍柱體積的Inclusion Body Binding Buffer和5倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。
注意：在純化包涵體蛋白時，所有緩沖液均含有變性劑，需要降低Binding Buffer中的咪唑濃度(5 mM或更低)。洗脫時，若蛋白在較高pH下洗脫失敗，可以選用低pH緩沖液作為洗脫緩沖液(pH6.5，pH5.9或pH4.5)。

Ⅴ 柱再生
當填料使用多次后，結合效率會有所下降(表現為流速變慢或填料失去藍綠色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用壽命和蛋白質的結合效率。
1、使用2倍柱體積的6M鹽酸胍沖洗后，使用3倍柱體積的去離子水沖洗。
2、使用1倍柱體積2% SDS沖洗。
3、依次使用1倍柱體積的25%、50%、75%和5倍柱體積乙醇沖洗，再依次使用1倍柱體積的75%、50%、25%的乙醇沖洗。
4、使用1倍柱體積的去離子水沖洗。
5、使用5倍柱體積含50 mM EDTA緩沖液(PH8.0)沖洗。
6、使用3倍柱體積去離子水，3倍柱體積20%乙醇沖洗。
7、封柱后2～8℃保存。
8、再次使用前，需先使用10倍柱體積去離子水沖洗，然后使用5個柱體積的50 mM NiSO4再生，3個柱體積的Binding Buffer平衡。

儲存條件：2～8℃，避免冷凍

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