北京百奧萊博供應的pEGFP-N2 熒光表達載體用于科研試驗，pEGFP-N2 熒光表達載體是我司眾多優質克隆與表達之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括pEGFP-N2 熒光表達載體在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：pEGFP-N2 熒光表達載體
產品貨號：QN1061
產品規格：20μl

pEGFP-N2 encodes a red-shifted variant of wild-type GFP (1–3) which has been optimized for brighter fluorescence and higher expression in mammalian cells. (Excitation maximum = 488 nm;emission maximum = 507 nm.) pEGFP-N2 encodes the GFPmut1 variant which contains the double-amino-acid substitution of Phe-64 to Leu and Ser-65 to Thr

載體信息：
啟動子：CMV
復制子：pUCori,f1ori
終止子：SV40poly(A)
載體別名：pEGFPN2, pEGFP N2
載體分類：哺乳細胞表達載體，熒光蛋白報告載體
載體大小：4737bp
載體標簽：C-EGFP
原核抗性：卡那霉素(Kanamycin)
篩選標記：新霉素(Neomycin)
克隆菌株：DH5α
表達宿主：哺乳細胞
培養條件：37℃，LB培養基
5" 測序引物：CMV-F：5"-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3"
3" 測序引物：EGFP-N：5"-CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG-3"

儲存條件：-20℃

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名稱：大腸桿菌BL21化學感受態細胞
貨號：BTN140428
規格：0.1mL*10
本產品是采用大腸桿菌BL21菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。本產品用作表達載體的宿主，適用于毒性蛋白的表達，適用于不是基于T7啟動子的表達系統。使用pUC19質粒檢測，本產品轉化效率可達107。
菌株基因型為：BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-)gal。

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養基等。

使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μL，根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μL感受態細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA 所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μL無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。

注意事項：
1. 涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA 總量較少，可取200-300μL轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm，2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2. 新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養
3. 涂布剩余的。

名稱：大腸桿菌HB101化學感受態細胞
貨號：BTN81221
規格：0.1mL*10
 HB101菌株是E.coli K12菌株與E.coli B菌株的雜合產物(同時也是Stbl3的原始菌株)。recA13突變可有效抑制長片段末端重復區的重組，降低錯誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液。hsdS20 背景使HB101缺失內切酶系統，增強了外源DNA的穩定性和提取質量。本產品是采用大腸桿菌HB101特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。

產品特點：
1. 具有鏈霉素抗性。
2.基因型：F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-)recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR)glnV44λ-。
3. 不存在 lacIqZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。
4. 該菌株遺傳性能穩定，使用方便，適用于各種基因重組實驗。

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養基等。

使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μL，可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞處于冰水混合狀態時，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μL感受態細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴25分鐘。
3. 42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘，晃動會降低轉化效率。
4. 每個離心管中加入450μL 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，200rpm 振蕩培養60分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含有相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃倒置培養12-16小時。

注意事項：
1. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
2. 涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA 總量較少，可取200-300μL轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(5000rpm，1分鐘)收菌后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
3. 新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
4. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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