北京百奧萊博供應的成神經細胞鑒定NF/NSE免疫組用于科研目的，本品質量穩定，價位合理，需要成神經細胞鑒定NF/NSE免疫組等蛋白質研究產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括成神經細胞鑒定NF/NSE免疫組化試劑盒(IHC)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：成神經細胞鑒定NF/NSE免疫組化試劑盒(IHC)
產品貨號：KFS026
產品規格：50T

本試劑盒可用于免疫組織化學方法以顯示人、大、小鼠來源的組織樣本NF/NSE抗原分布。本試劑盒適用于常規福爾馬林固定石蠟包埋切片、冰凍切片、培養固定的細胞涂片等。我司即用型一步法免疫組化檢測試劑盒與常規免疫組化染色試劑盒相比，具有高靈敏性、高特異性及操作簡便的優點。多個HRP聚合物直接與二抗相連，大大放大了抗原抗體結合的信號，減少了孵育步驟，孵育時間縮短為10分鐘。試劑盒不含有生物素，完全避免了內源性生物素造成的背景影響。試劑盒提供的DAB顯色試劑為增強型顯色試劑，且自帶稀釋液，避免了由于水質的不同對DAB顯色造成的影響；與一般DAB試劑相比，增強型的穩定性顯著提高，顯色更醒目，敏感性更高。

注意事項：
1. 檢測標本時需同時做陰性對照和陽性對照。
2. 增強劑中含有0.1% ProClin 300 防腐劑，使用時請注意自我防護。
3. DAB 顯色液需現用現配，避光放置，且在2 小時內染色。
4. 在超過有效期的試劑盒中一種或多種試劑的活性可能降低，因此不得使用過期的試劑盒，不同批號間試劑盒也不能交叉混用。

根據您的關注的成神經細胞鑒定NF/NSE免疫組化試劑盒(IHC)，您可能還對以下產品有需求：



名稱：細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒
貨號：YT041
規格：50次|100次
本試劑盒提供了一種比較簡單、方便的從培養細胞或新鮮組織中抽提細胞核蛋白與細胞漿蛋白的方法。約90分鐘就可以完成培養細胞的細胞核蛋白與細胞漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，報告基因檢測以及酶活力測定等后續操作。

在研究細胞時經常要研究細胞的不同組份，而研究得zuì多的兩個細胞組份就是細胞核和細胞漿。分離細胞核蛋白和細胞漿蛋白，不僅可以用于研究蛋白在細胞內的定位，而且很多時候分離出來的核蛋白可以用于轉錄調控方面的研究，例如EMSA(也稱gel shift)，footprinting等。

本試劑盒是通過細胞漿蛋白抽提試劑A和B，在低滲透壓條件下，使細胞充分膨脹，然后破壞細胞膜，釋放出細胞漿蛋白，然后通過離心得到細胞核沉淀。zuì后通過高鹽的細胞核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。本試劑盒可以抽提50個樣品，如果每個樣品的數量為約二百萬細胞或約30-50毫克組織。

產品組份：
細胞漿蛋白抽提試劑A————10ml
細胞漿蛋白抽提試劑B————0.5ml
細胞核蛋白抽提試劑 ————2.5ml

注意事項
1. 需自備PMSF。PMSF一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3分鐘內加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(YT615)可以向百奧萊博訂購。
2. 抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
3. 本試劑盒對于組織樣品，僅適合于新鮮組織，對凍存過的組織抽提效果很差。可以抽提的組織樣品數通常不足50個。
4. 使用本試劑盒抽提到的細胞核蛋白與細胞漿蛋白均可直接用百奧萊博的BCA蛋白濃度測定試劑盒(YT036、YT037)測定蛋白濃度。但不適合用Bradford法測定蛋白濃度。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

名稱：His標簽蛋白純化試劑盒(包涵體蛋白)
貨號：WE0266
規格：5ml
  該鎳柱純化系統對6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力，能夠一步純化帶有6個組氨酸親和標簽的蛋白。該系統具有4個Ni2+螯合位點，較只有3個螯合位點的Ni-IDA結合Ni2+更為牢固，有效防止純化過程中Ni2+脫落且增強對His標簽蛋白的結合能力，提高純化效率。較高的基團密度，大大提高了蛋白載量。該系統在天然或變性條件下，對來源于各種表達系統(如桿狀病毒，哺乳細胞，酵母以及細菌)中的His標簽蛋白，均有很好的純化效果。本產品已螯合鎳離子，可直接用于包涵體蛋白的純化，使用方便，快捷。

鎳柱參數：
支持物：CL-6B瓊脂糖凝膠
載量：20-30 mg His標簽蛋白/ml填料
粒徑：50-160μM

試劑盒組成：

組份	5ml
Ni-Agarose Resin	5ml
Bacterial Protein Extraction Reagent	65ml
Urea	365 g
1 M Tris-HCl(pH7.9)	15ml
1 M Imidazole	65ml
3 M NaCl	120ml
Protease Inhibitor Cocktail	700μl
吸附柱(12ml)	1套

保存條件：Protease Inhibitor Cocktail，-20℃；Ni-Agarose Resin，2～8℃，避免冷凍；其它組分，2～8℃

注意事項：
1、在純化之前采用電泳檢測蛋白的可溶性，本試劑盒只適合于包涵體蛋白的純化，如需純化可溶性蛋白，請選擇我公司的可溶性蛋白純化試劑盒，貨號為WE0267。
2、緩沖液中不建議使用 β-巰基乙醇、DTT和EDTA。
3、整個純化過程中切忌凝膠脫水變干。
4、為提高純化效率，先確定Binding Buffer和Elution Buffer中Imidazole(咪唑)的zuì佳使用濃度。必要時可以使用線性或梯度濃度的Imidazole(咪唑)(10-500 mM)洗脫蛋白，并通過SDS-PAGE或Western Blotting來檢測目的蛋白的純度。
5、請使用高純度的試劑配制緩沖液，并通過0.22μM或者0.45μM過濾器過濾。為避免柱子被堵塞，建議將裂解液進行離心，或者使用0.22μM或者0.45μM過濾器過濾。
6、柱再生時，保證每步洗完后都要用足夠的去離子水沖洗至中性。
7、如果有些蛋白采用尿素的溶解效果不好，可以采用鹽酸胍進行溶解。

使用方法：

I 緩沖液的準備
包涵體蛋白純化緩沖液配方：

組份	Tris-HCl(pH7.9)	Imidazole	NaCl	Urea
Binding Buffer	20 mM	5 mM	0.5 M	8 M
Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M	8 M

II 組裝層析柱
1、將Ni-Agarose Resin填料混勻后加入層析柱，室溫靜置10分鐘，待凝膠與溶液分層后，把底部的出液口打開，讓乙醇通過重力作用緩慢流出。。
注意：
1)填料的上層是乙醇保護層，將填料和乙醇一起混勻，以每ml填料純化20-30mg His標簽蛋白計算，取需要的填料與乙醇的混合液加入層析柱。
2)如果乙醇不流出，可以給柱子一個外力，例如用大拇指對柱口輕輕按壓一下，迫使乙醇流出。
3)本實驗都是通過重力作用使溶液流出。
2．向裝填好的柱中加入5倍柱體積的去離子水將乙醇沖洗干凈后，再用8倍柱體積的Binding Buffer平衡柱子，平衡結束后即可上樣。
注意：柱體積指的是填料的體積。

III 包涵體蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入2ml細菌裂解液(每1ml細菌裂解液中請預先加入10μl 蛋白酶抑制劑混合物)，如有需要可以超聲裂解菌體。
注意：
1)當提取物粘度高或提取蛋白為包涵體時，建議加入DNase I和Lysozyme。每1ml 細菌抽提試劑中加入1μl DNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可單獨從我公司購買，貨號：Lysozyme(WE0214S)、 DNase I(WE0213S)，如使用其它公司產品，請按照相應說明書操作。
2)超聲過程中保持菌液處于冰浴中，超聲條件依賴于所使用的超聲儀功率，探頭種類，容器的大小形狀，需實驗中自己摸索，應避免連續超聲導致的大量產熱，可分成短時間，多次超聲，通過一定的間隔時間避免溶液過熱。zuì終菌液變清即可。
2、10000×g，4℃離心15分鐘，分離上清和沉淀，并收集沉淀。
3、將沉淀重懸于Binding Buffer中，盡量混勻使包涵體充分溶解。
4、10000×g離心20分鐘，收集上清。
注意：建議將離心后的上清以孔徑為0.22μM或者0.45μM的濾膜過濾。
5、將上清負載上柱，流速為10倍柱體積/小時，收集流穿液。
注意：
1)本試劑盒中附帶有一塊篩板，使用時先將篩板加至填料的上層，再將處理好的上清負載上柱。該篩板可用于雜質較多的蛋白的過濾，防止過多的雜蛋白堵塞柱子，但是篩板放入柱子后不易取出。
2)通過控制加入的上清(菌體裂解液)的速度來控制流速。
6、使用15倍柱體積的Binding Buffer沖洗柱子，洗去雜蛋白。
7、使用適量Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
注意：通過蛋白監測儀監測，洗脫峰可以分管收集，每1ml收集1管。
8、洗脫后，依次使用5倍柱體積的Binding Buffer，5倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。
注意：
1)在純化包涵體蛋白時，所有緩沖液均含有變性劑，可以降低Binding Buffer中的咪唑濃度(比5 mM更低)。洗脫時，若蛋白在較高pH下洗脫失敗，可以選用低pH緩沖液作為洗脫緩沖液(pH6.5，pH5.9或pH4.5)。
2)如果是分段梯度洗脫，zuì大洗脫緩沖液中咪唑濃度未達到500 mM，則使用濃度為500 mM的咪唑進行洗脫10倍柱體積后，再進行第8步的操作。

Ⅳ 柱再生
當填料使用多次后，結合效率會有所下降(表現為流速變慢或填料失去藍綠色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用壽命和蛋白質的結合效率。
1、使用2倍柱體積的6 M鹽酸胍沖洗后，使用3倍柱體積的去離子水沖洗。
2、使用1倍柱體積的2% SDS沖洗。
3、依次使用1倍柱體積的25%、50%、75%和5倍柱體積的乙醇沖洗，再依次使用1倍柱體積的75%、50%和25%的乙醇沖洗。
4、使用1倍柱體積的去離子水沖洗。
5、使用5倍柱體積含50 mM EDTA緩沖液(PH8.0)沖洗。
6、使用3倍柱體積去離子水，3倍柱體積20%乙醇沖洗。
7、2～8℃保存。
8、再次使用前，需先使用10倍柱體積去離子水沖洗，然后使用5個柱體積的50 mM NiSO4 再生，3個柱體積的Binding Buffer平衡。

儲存條件：-20℃

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