高分子量非變性電泳蛋白質Mark由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，高分子量非變性電泳蛋白質Mark是我司眾多優質蛋白質研究之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括高分子量非變性電泳蛋白質Marker(66～669 kD)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：高分子量非變性電泳蛋白質Marker(66～669 kD)
英文名稱：High Molecμlar Weight Native Electrophoresis Protein Marker
產品貨號：RFT151
產品規格：20次(100μl)

本產品是5種高純蛋白質干粉混合物，總蛋白含量為250μg。具體蛋白含量如下：

蛋白名稱	分子量(kD)	蛋白來源	蛋白含量(μg)
Thyroglobμlin	669	porcine thyroid	76
Ferritin	440	equine spleen	50
Catalase	232	bovine liver	36
Lactate dehydrogenase	140	bovine heart	48
Albumin	66	bovine serum	40

分子量范圍為66kD-669kD，經過非變性電泳后，用考馬斯亮藍染色后可以得到分布均勻密度相近的5條帶。

使用說明：
1. 取100μl非變性蛋白上樣緩沖液(1×)加入到蛋白干粉混合物中，徹底混勻融化后，-20℃貯存。
2. 常溫融化后，徹底混勻，上樣電泳。
注：上樣量根據膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來，0.75mm×5mm(厚度×寬度)的加樣孔上樣5μl，其他規格梳子請適當調整上樣量。
3. 電泳結束后，染色，觀察結果。
注：使用銀染時，由于靈敏度高于考馬斯亮藍染色方法，可以適當降低Marker上樣量，一般稀釋50倍。

注意：
1. 本蛋白Marker不適用于變性蛋白電泳(SDS-PAGE)，因為在SDS存在下，含有多個亞單位的蛋白會不同程度解聚。
2. 在非變性條件下，蛋白的遷移與蛋白的電荷、蛋白形狀以及蛋白分子量都有關。因此，在一種凝膠濃度下使用本Marker不能估計出目的蛋白的分子量。非變性電泳中，蛋白分子量的確定應該是在不同凝膠濃度下，確定出蛋白的Rf值，繪制出凝膠濃度對Rf的曲線從而判定蛋白的分子量。

儲存條件：-20℃，有效期12個月。

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名稱：L-谷胱甘肽(還原型)
貨號：BTN120705
規格：5g
還原型谷胱甘肽是人類細胞質中自然合成的一種肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成，含有巰基(－SH)，廣泛分布于機體各器官內，作為一種抗氧化劑，可以保護肝臟細胞膜，增強肝臟的解毒能力，為維持細胞生物功能呈有重要作用。本產品可用于配制純化GST標簽蛋白的洗脫液。



儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期兩年。

名稱：CHAPS
貨號：BTN131043
規格：5g
CHAPS全名是(3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate)，中文名是3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽，多一個羥基就是CHAPSO，全名是3-[(3- 膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-2- 羥基-1- 丙磺酸鹽。它們的特點是能夠破壞非特異性蛋白相互作用。與非離子型去垢劑相比引起蛋白聚集的幾率更小。電中性并且不會引起變性。可以通過透析去除。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

名稱：His標簽蛋白純化試劑盒(可溶性蛋白)
貨號：WE0267
規格：5ml
  本試劑盒包含Ni-Agarose填料、親和柱空柱以及可溶性His融合蛋白純化所需的全部試劑(細菌裂解液、蛋白酶抑制劑混合物、結合緩沖液和洗脫緩沖液組分)，使用方便。該鎳柱純化系統對6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力，能夠一步純化帶有6個組氨酸親和標簽的蛋白。該系統具有4個Ni2+螯合位點，較只有3個螯合位點的Ni-IDA結合Ni2+更為牢固，有效防止純化過程中Ni2+脫落且增強對His標簽蛋白的結合能力，提高純化效率。較高的基團密度，大大提高了蛋白載量。該系統在天然或變性條件下，對來源于各種表達系統(如桿狀病毒，哺乳細胞，酵母以及細菌)中的His標簽蛋白，均有很好的純化效果。本產品已螯合鎳離子，可直接用可溶性蛋白的純化，使用方便，快捷。

鎳柱參數：
支持物：CL-6B瓊脂糖凝膠
載量：20-30 mg His標簽蛋白/ml填料
粒徑：50-160μM

試劑盒組成：

組份	5ml
Ni-Agarose Resin	5ml
Bacterial Protein Extraction Reagent	65ml
1 M Tris-HCl(pH7.9)	15ml
1 M Imidazole	65ml
3 M NaCl	120ml
Protease Inhibitor Cocktail	700μl
吸附柱(12ml)	一套

保存條件：Protease Inhibitor Cocktail，-20℃；Ni-Agarose Resin，2～8℃，避免冷凍；其它組分，2～8℃

注意事項：
1、在純化之前采用電泳檢測蛋白的可溶性，本試劑盒只適合于可溶性蛋白的純化，如需純化包涵體蛋白，請選擇我公司的包涵體蛋白純化試劑盒，貨號為WE0266。
2、緩沖液中不建議使用 β-巰基乙醇、DTT和EDTA。
3、整個純化過程中切忌凝膠脫水變干。
4、為提高純化效率，先確定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的zuì佳使用濃度。必要時可以使用線性或梯度濃度的咪唑濃度，Binding Buffer的范圍為0-10 mM，洗脫緩沖液的范圍為10-500 mM來進行。并通過SDS-PAGE或Western Blotting來檢測目的蛋白的純度。
5、請使用高純度的試劑配制緩沖液，并通過0.22μM或者0.45μM過濾器過濾。為避免柱子被堵塞，建議將裂解液進行離心，或者使用0.22μM或者0.45μM過濾器過濾。
6、柱再生時，保證每步洗完后都要用足夠的去離子水沖洗至中性。

使用方法：

I 緩沖液的準備
可溶性蛋白純化緩沖液配方：

組份	Tris-HCl(pH7.9)	Imidazole	NaCl
Soluble Binding Buffer	20 mM	10 mM	0.5 M
Soluble Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M

II 組裝層析柱
1、將Ni-Agarose Resin填料混勻后加入層析柱，室溫靜置10分鐘，待凝膠與溶液分層后，把底部的出液口打開，讓乙醇通過重力作用緩慢流出。
注意：
1)填料的上層是乙醇保護層，將填料和乙醇一起混勻，以每ml填料純化20-30mg His標簽蛋白計算，取需要的填料與乙醇的混合液加入層析柱。
2)如果乙醇不流出，可以給柱子一個外力，例如用大拇指對柱口輕輕按壓一下，迫使乙醇流出。
3)本實驗都是通過重力作用使溶液流出。
2、向裝填好的柱中加入5倍柱體積的去離子水將乙醇沖洗干凈后，再用10倍柱體積的Binding Buffer平衡柱子，平衡結束后即可上樣。
注意：柱體積指的是填料的體積。

III 可溶性蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入1-5ml細菌裂解液(每1ml 細菌抽提試劑中已加入10μl 蛋白酶抑制劑混合物)，超聲裂解菌體。
注意：
1)當提取物粘度高或提取蛋白為包涵體時，建議加入DNase I和Lysozyme。每1ml 細菌抽提試劑中加入1μl DNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可單獨從我公司購買，貨號：Lysozyme(#WE0214)、 DNase I(#WE0213A)，如使用其它公司產品，請按照相應說明書操作。
2)超聲過程中保持菌液處于冰浴中，超聲條件依賴于所使用的超聲儀功率，探頭種類，容器的大小形狀，需實驗中自己摸索，應避免連續超聲導致的大量產熱，可分成短時間，多次超聲，通過一定的間隔時間避免溶液過熱。zuì終菌液變清即可。
2、10000 rpm,4℃離心3分鐘，收集上清中的可溶性蛋白。
3、用Binding Buffer將菌體裂解液等倍稀釋后負載上柱，流速為10倍柱體積/小時，收集流穿液。
注意：
1)本試劑盒中附帶有一塊篩板，使用時先將篩板加至填料的上層，該篩板可用于雜質較多的蛋白的過濾，防止過多的雜蛋白堵塞柱子的作用。再將處理好的樣品負載上柱，但是篩板放入柱子后就不易取出。
2)通過控制加入的菌體裂解液的速度來控制流速。
4、使用15倍柱體積的Soluble Binding Buffer沖洗柱子，洗去雜蛋白。
5、使用適量Soluble Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
注意：洗脫峰可以分管收集，每1ml收集1管，并采用蛋白監測儀監測，收集洗脫峰。
6、洗脫后，依次使用10倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。
注意：如果是分段梯度洗脫，zuì大洗脫緩沖液中咪唑濃度未達到500 mM時，則使用濃度為500 mM的咪唑進行洗脫10倍柱體積后，再進行第6步的操作。

Ⅳ 柱再生
當填料使用多次后，結合效率會有所下降(表現為流速變慢或填料失去藍綠色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用壽命和蛋白質的結合效率。
1、使用2倍柱體積的6 M鹽酸胍沖洗后，使用3倍柱體積的去離子水沖洗。
2、使用1倍柱體積的2% SDS沖洗。
3、依次使用1倍柱體積的25%、50%、75%和5倍柱體積的乙醇沖洗，再依次使用1倍柱體積的75%、50%和25%的乙醇沖洗。
4、使用1倍柱體積的去離子水沖洗。
5、使用5倍柱體積含50 mM EDTA緩沖液(PH8.0)沖洗。
6、使用3倍柱體積去離子水，3倍柱體積20%乙醇沖洗。
7、2～8℃保存。
8、再次使用前，需先使用10倍柱體積去離子水沖洗，然后使用5個柱體積的50 mM NiSO4再生，3個柱體積的Binding Buffer平衡。

儲存條件：-20℃

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