端粒酶活性實時定量PCR法檢測試的品牌是百奧萊博，是優質的蛋白質研究產品，本制品僅用于生物化學研究方面，端粒酶活性實時定量PCR法檢測試是我司眾多優質蛋白質研究之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括端粒酶活性實時定量PCR法檢測試劑盒(人)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：端粒酶活性實時定量PCR法檢測試劑盒(人)
產品貨號：KFS308
產品規格：20T

端粒是真核生物染色體末端特殊的DNA-蛋白結構，含多個重復序列（5’-TTAGGG-3’），端粒結構的形成和功能的維持需要端粒結合蛋白的直接或間接參與。端粒酶是細胞體內一種核糖核蛋白復合體，是由RNA 和蛋白質亞基組成的一種特殊的逆轉錄酶，其可以利用自身的RNA 模板合成末端DNA，并添加到染色體末端以克服末端序列的丟失，從而使細胞獲得增殖能力。

端粒酶蛋白催化亞基（TERT 或TRT）具有反轉錄酶的主要特征，其表達在正常細胞中受到抑制，研究表明，TERT或TRT 的表達與端粒酶活性的表達一致，與端粒酶的活化程度密切相關。Wisman 等在人卵巢癌中利用逆轉錄PCR 檢測hTERT 的mRNA 的表達，并采用TRAP 法檢測端粒酶活性，結果證實二者均存在于惡性腫瘤中并且表達模式相同。基于上述原理，我司實時熒光定量PCR 端粒酶檢測試劑盒通過檢測TERT 的mRNA 表達水平來間接反應端粒酶的活性。

實時熒光定量PCR（SYBR Green Real-time PCR）方法以其的快速性及定量性被廣泛應用于科研領域，使用本試劑盒可以準確簡便地進行mRNA 的表達分析。試劑盒采用SYBR Green qPCR Master Mix 為熒光實時定量PCR 和Two-Step 熒光實時定量PCR 設計的zuì優反應體系，并結合特異性的細胞端粒酶催化亞基基因TERT 引物，簡化實驗步驟和提高實驗效率。Master Mix 含有Maxima Hot Start Taq DNA 聚合酶、dNTPS、進行優化處理的PCR 反應緩沖液以及SYBR Green 染料。使用Hot Start Taq DNA 聚合酶，為PCR 反應提供了更高的產量和靈敏度、特異性，能夠檢測低至10 個拷貝的目的基因。

本試劑盒可以在寬廣的定量區域內得到良好的標準曲線，對細胞基因進行準確定量、檢測，重復性好，可信度高。只需加入樣品DNA 模板，反應即可進行。

備注：由于對端粒酶進行檢測的所有方法都不能完全定量的檢測細胞端粒酶的活性，同時TERT 基因或者蛋白的表達與端粒酶之間的間接關系準確性有待于進一步研究，望客戶根據實際選擇使用。

適應于大多數的Real-time PCR 擴增儀，包括Applied Biosystems，Eppendorf，Corbett，Bio-Rad，Roche，杭州博日（Line-GeneBioer）等品牌的PCR 擴增儀。

根據您的關注的端粒酶活性實時定量PCR法檢測試劑盒(人)，您可能還對以下產品有需求：



名稱：一站式蛋白質非變性PAGE電泳套裝(低pH)
貨號：BTN81212C
規格：30次
非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native PAGE)是目前電泳法分離活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根據分子量大小分離蛋白質不同，它是根據蛋白質分子大小、形狀、電荷密度三個主要參數分離蛋白質。由于蛋白質的pI各不相同，所以對不同蛋白質需要選用具有不同pH的電泳體系。單獨配制不同pH的Native PAGE電泳膠十分繁瑣，為此本公司開發了本產品。

產品特點：
1．即開即用，不需單獨準備各種成分，十分方便。還免去了實驗人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺
2．非變性，電泳過程中蛋白質保持天然的構象和亞基之間的相互作用，得到的蛋白質一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白沒有活性)。
3．可用于分析蛋白質和DNA或RNA的相互作用、蛋白修飾、蛋白構型改變、回收有活性蛋白質等試驗。
4．電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實驗。
5．提供具有3種不同pH的緩沖液套裝，便于客戶選擇zuì適合的緩沖液體系。

產品組成：

成分	規格
丙烯酰胺干粉	60g
甲叉雙丙烯酰胺干粉	3g
TEMED	1.5ml
過硫酸銨干粉	1g
高中低緩沖液套裝選一	ABC之一(見下)
說明書	1份
高pH緩沖液套裝(只有BTN81212A有此成分)
高pH濃縮膠配膠液(pH6.7)，4×	100ml
高pH分離膠配膠液(pH8.9)，4×	200ml
高pH電泳液(pH8.3)	10L(干粉)
高pH上樣液，5×	1ml
中pH緩沖液套裝(只有BTN81212B有此成分)
中pH濃縮膠配膠液(pH5.5)，4×	100ml
中pH分離膠配膠液(pH7.5)，4×	200ml
中pH電泳液(pH7.0)干粉A	55.2g
中pH電泳液(pH7.0)干粉B	10g
中pH上樣液，5×	1ml
低pH緩沖液套裝(只有BTN81212C有此成分)
低pH濃縮膠配膠液(pH6.7)，4×	100ml
低pH分離膠配膠液(pH4.3)，4×	200ml
低pH電泳液(pH4.5)	10L(干粉)
低pH上樣液，5×	1ml

注：高、中和低pH緩沖液套裝里面均含100mL濃縮膠配膠液、200mL分離膠配膠液、10 L電泳液(干粉)和1mL上樣液，只是pH不同。

儲存條件：常溫運輸和保存(上樣液需-20℃保存)，保存期為一年。

使用方法：
如何選擇緩沖液?
高pH濃縮膠，高pH分離膠，高pH電泳液和高pH上樣液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。選擇適當pH的緩沖液(包括上樣液，電泳液，配膠液等)對蛋白質非變性PAGE非常重要，緩沖液的zuì佳pH又跟目的蛋白質的pI值密切相關。如果pH遠離pI，則蛋白質分子帶電多(電荷密度大)，電泳速度快，分辨率高。但過酸過堿又容易使蛋白質結構變性，失去活性，所以zuì佳pH條件就是在電泳分辨率和維持活性之間尋找平衡，需要針對每種蛋白質進行摸索或通過滴定曲線來確定，沒有通用的電泳緩沖體系。由于有近半數的蛋白質pI在4-6.5，所以在不知道目標蛋白的pI時，可以先選用高pH緩沖系統。

一、配制分離膠
1．確定濃度。對分子量在100Kd以上的蛋白質，可選用3-5%的膠；對分子量在20-150KD之間的蛋白質，可選用5-10%的膠；對分子量在10-80KD之間的蛋白質，可選用10-15%的膠。對未知樣品，建議使用7.5%的膠。
2．配制10%的APS(過硫酸銨)：按每0.1克過硫酸銨干粉加1mL去離子水的比例配制10%的APS溶液，該溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19:1)溶液:在本產品提供的裝有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自備的去離子水和3g甲叉雙丙烯酰胺,充分搖晃直到溶解(約需10-20分鐘)即得200mL 30%丙烯酰胺(19:1)溶液。此溶液zuì好在一個月內用完，必須4℃避光保存。
4．配10mL分離膠(如果配制其他體積,請按比例調節各成分用量):在一個25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去離子水、3.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分離膠配膠液。
5．搖晃混勻后抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應，不去除的話將影響丙烯酰胺聚合反應)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(這是配制10mL膠的用量，配制更大體積的膠則按比例增加)，迅速搖勻后倒膠。注意：如果購買的是低pH緩沖系統，由于在低pH緩沖液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述兩成分的用量。
7．在膠面距離頂部1-1.5 cm的時候停止灌膠。然后覆蓋一層1-5 mm厚的水，使膠頂部液面平整。由于比重不同，水和丙烯酰胺溶液不會混合。
8．室溫聚合30-60分鐘后，用1×分離膠配膠液洗滌凝固的膠的頂部，待用。

二、配制濃縮膠(濃縮膠可以提高分辨率，適合于成分復雜的樣品，一般使用濃度為4%。使用濃縮膠時蛋白質泳動速度主要跟其尺寸和形狀相關。因濃縮膠pH跟分離膠pH不同，蛋白質可能會發生聚合和沉淀。對成分單一的樣品，可以不用濃縮膠，此時蛋白的泳動速度主要跟其電荷密度，尺寸和形狀相關。)
1．配10mL濃縮膠(如果配制其他體積,請按比例調節各成分用量):在一個25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去離子水、1.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×濃縮配膠液。
2．搖晃混勻后抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應，不去除將影響丙烯酰胺聚合反應)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(這是配制10mL膠的用量，配制更大體積的膠則用量需按比例增加)，迅速搖勻后在已經凝固的分離膠上倒膠。
4．在液面達到頂部時停止灌膠，插入梳子。
5．室溫聚合30-60分鐘，拔出梳子，用1×電泳液沖洗加樣孔。

三、電泳
1．將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽加入足夠1×電泳液。注：本產品提供10升的三種不同pH的電泳液干粉中的一種，低PH和高PH值電泳液用前需將所有干粉溶解在1 L水中得10×電泳液，可以室溫放置，用時再稀釋成1×電泳液。一般不需要再調節pH，但保險起見，可以用pH試紙測試一下1×電泳液。高中低pH電泳緩沖液的pH分別是8.3，7.0和4.5。
 注意：中pH值的電泳液干粉只能配1x電泳液，否則不溶解。稱取中pH電泳液(pH7.0)干粉A，5.52g,中pH電泳液(pH7.0)干粉B 1g混勻，加去離子水至徹底溶解，調PH7.0，定容至1L。客戶根據可實際需要量按比例增減。
2．連接電。如果濃縮膠和分離膠的pH高于目標蛋白pI，目標蛋白將帶負電荷并向陽移動，可以按標準的SDS-PAGE方法接通電(上陰下陽)；如果濃縮膠和分離膠pH低于目標蛋白pI，目標蛋白將帶正電荷并向陰級移動，此時應該下陰上陽。
3．300V預電泳直到電流不再降低(約需要30分鐘)以去除殘留過硫酸銨。
4．換電泳液。
5．在液體蛋白質樣品中加入5×上樣液(16μl液體樣品加4μL上樣液)后上樣。0.75 mm厚的膠可以上10μl，1.5 mm厚的膠可以上20μl。在未用加樣孔中也要加1×上樣液以防有樣品的空道的樣品擴散。注意：如果用考染檢測，每個孔的蛋白zuì好在50-100μg總蛋白，如果銀染則只需要1ug即可。樣品如果是蛋白質沉淀，可用1×上樣液直接溶解蛋白質沉淀后再上樣。蛋白質溶液或沉淀中不能含有能夠改變上樣液pH的殘留成分(如蛋白質沉淀劑TCA)，用前zuì好用pH試紙測試一下，不在上樣液的pH范圍時就用酸或堿調到正常范圍。大量樣品可用透析法調pH。
6．上樣自備的天然PAGE蛋白質標準或等電電泳的標準品(如果有的話)。
7．用15 mA(對0.75 mm厚的膠)或30mM(對1.5mm厚的膠)的電流電泳直到染料移動到分離膠底部。微型膠一般需要1-2小時。注意：電泳過程zuì好在冷室或有冷卻系統，以免電泳產熱使蛋白質變性。
8．終止電泳，取出凝膠進行后續的實驗處理(如染色或酶活性檢測)。

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貨號	名稱	規格
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RFT198	蛋白酶抑制劑混合物(植物蛋白提取用)	1ml|5×1ml
KFS229	TERT蛋白檢測試劑盒	50T
SY0354	4×Tris-HCl-SDS分離膠緩沖液，pH8.8	250ml

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