WH0177 蛋白marker(14.4~94

產品簡介
蛋白marker(14.4~94由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持,本品用于科研目的,本產品質量好,且具價格,深為用戶稱道,了解更多蛋白marker(14.4~94等蛋白質研究產品請聯系我司咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括蛋白marker(14.4~94kDa)在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:蛋白marker(14.4~94kDa)
英文名稱:Protein Marker(14.4kDa~94kDa)
產品貨號:WH0177
產品規格:20次(200μl)
本制品是由7種蛋白質分別純化后混合而成的蛋白質溶液,分子量范圍為14.4-94.0kDa。經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳后用考馬斯亮藍R-250(Coomassie Brilliant Blue R-250)染色可得清晰的7條蛋白帶。本制品中每種蛋白約0.1-0.2μg/μl。
本制品為即用型產品,使用前請將蛋白質Marker置于室溫數分鐘,徹底溶解并輕彈混勻后,無需加熱,取10μl蛋白質Marker加入到凝膠(1mm厚mini-gel)孔內進行電泳;若加樣孔較大,可適當增加蛋白質Marker用量。使用方便,電泳圖像清晰。

貯存液成分:62.5mM Tris-HCl(pH7.0);5mM EDTA;50mM DTT;30mM NaCl;0.01%溴酚蘭;50%甘油;2%SDS。
附:
1× SDS-PAGE buffer:3.0g Tris.ba
1× Transfer buffer(干轉):5.8g Tris.ba
保存條件:短期內多次使用置于4℃,-20℃保存一年。
使用方法:
取10μl本產品直接加入到SDS-聚丙烯酰胺凝膠的加樣孔中,進行電泳。建議使用分離膠濃度為12%,電壓120-200 V,電壓過低會導致小分子量的蛋白條帶彌散。
電泳條件:
凝膠濃度為12-15% SDS-PAGE,Mini電泳裝置,建議電泳條件為:電壓120-200V,時間30-50min。
注意事項:
1.本產品可用考馬斯亮藍R-250 (Coomassie BrilliantBlue R-250)染色。
2.當Marker中有額外條帶出現時,需補加新配置的DTT至終濃度100mM。儲存緩沖液中DTT氧化易導致Marker中額外條帶的出現。
根據您的關注的蛋白marker(14.4~94kDa),您可能還對以下產品有需求:
名稱:動物細胞裂解液B(變性)
貨號:BTN80807B
規格:100mL
本產品含有多種細胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非變性或變性條件下迅速裂解組織或培養細胞,使之釋放出細胞內蛋白,用于后續實驗。
產品特點:
1.快速裂解,多種裂解成分經過精心優化,能快速使細胞裂解。
2. 非變性(BTN80807A)產品能zuì大程度地保留蛋白天然結構和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,還可以用于蛋白活性檢測(信號傳遞研究和酶動力學檢測)和Western Blot等各種后續實驗。
3.變性(BTN80807B)裂解細胞的效率更高,主要用于對抗原空間構型不敏感的免疫共沉淀實驗,還可以用于Western Blotting。
4.適用于培養細胞(包括懸浮細胞)和新鮮組織。
儲存條件:常溫運輸、4℃保存,有效期一年。
注意事項:
1. 如果在本產品中額外再加入終濃度為1×的、新鮮配制的蛋白酶抑制劑復合物,可以更有效地抑制蛋白酶活性,防止蛋白降解。
2. 如果用于信號傳遞研究,zuì好在本產品中加入終濃度為1×的、新鮮配制的磷酸酶抑制劑復合物。
3. 整個裂解步驟都要在冰浴或4℃操作。本產品和PBS 均需預先冷卻。
4. 本產品所含有較高濃度的去垢劑會對Bradford蛋白濃度測定有較大影響,因此只能使用BCA法測定蛋白濃度。
使用方法:
一:處理貼壁的培養細胞
1. 去除貼壁細胞培養液,用冰浴預冷的PBS 洗兩遍,去盡殘留的PBS。
2. 將培養板放置在冰上待用。
3. 按每106個細胞加入0.1mL 本產品(或100mm 貼壁細胞加1mL 本產品)的比例向培養板中加入適量的本產品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白濃度約在5-10mg/mL 之間)。
注意:裂解效率跟細胞數量和本產品用量的比例密切相關。一般情況下6孔板的單孔(1~2×106細胞)需要0.1~0.2mL本產品;25 cm2培養瓶(3~6×106細胞)需要0.3~0.6mL;75 cm2培養瓶(1~2×107細胞)需要1~2mL。對于特別大或特別小的細胞,需要用戶摸索zuì佳用量。
4. 冰上放置10-30分鐘(zuì佳時間跟細胞系相關),其間偶爾輕輕搖晃或用槍頭輕輕吹打。
5. 將細胞培養板傾斜使上清液匯集在一端,并將其全部轉移到一個新的1.5mL塑料離心管中。
6. 15000×g,4℃離心10分鐘,將上清轉移到一個新的1.5mL塑料離心管中,放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意:如果用于免疫沉淀,zuì好新鮮使用。
7. 用前zuì好先測定上清液的蛋白濃度,然后再進行后續的電泳、Western或免疫沉淀操作。
二:處理懸浮細胞
1. 400×g,4℃離心10分鐘收集懸浮細胞,棄上清。
2. 用等體積的預冷PBS 洗滌細胞沉淀兩遍,步驟同步。
3. 按每106個細胞加入0.1mL 本產品的比例加入本產品,充分懸浮細胞。
4. 冰上放置15分鐘裂解細胞,期間偶爾輕柔震蕩。
5. 15000×g,4℃離心10分鐘,將上清轉移到一個新的1.5mL塑料離心管中。為避免吸取到細胞沉淀,zuì好留20-40μL液體不取。
6. 將上清液放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意:如果用于免疫沉淀,zuì好新鮮使用。
7. 使用前zuì好先測定上清液的蛋白濃度,然后再進行后續的電泳、Western或免疫沉淀操作。
三:處理組織塊
1. 稱量組織塊,用毛玻片或玻璃勻漿器研磨或勻漿,用5-10倍體積的、預冷的PBS洗兩次(包括沖洗器材)。
2. 將勻漿物轉移到離心管中,1500g、4℃離心5分鐘后棄上清。
3. 按每50mg 組織加入0.2mL 本產品的比例加入預冷的本產品,吹打混勻,放置冰上。
4. 每隔5分鐘振蕩器輕柔振蕩一次,共4次。
5. 15000×g、4℃離心10分鐘,將上清轉移到一個新的1.5mL塑料離心管中,放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意:如果用于免疫沉淀,zuì好新鮮使用。
6. 使用前zuì好先測定上清液的蛋白濃度,然后再進行后續的電泳、Western或免疫沉淀操作。
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