包涵體蛋白溶解及復性套裝由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研試驗，本品質量穩定，價位合理，需要包涵體蛋白溶解及復性套裝等蛋白質研究產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括包涵體蛋白溶解及復性套裝在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：包涵體蛋白溶解及復性套裝
英文名稱：Inclusion Body Protein Solubilization & Refolding Pack
產品貨號：BTN100302
產品規格：100次

本產品用E.coli作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵體，其中的重組蛋白質只完成部分折疊，還沒形成zuì后的正確空間結構，所以沒有生物活性，要得到有活性的重組蛋白，還需要后續的溶解和復性(重折疊)處理。目前zuì常用的溶解包涵體的方法是用尿素，Sarkosyl，鹽酸胍等強變性劑，其缺點是包涵體中的重組蛋白質被徹底變性，使后續的蛋白質復性處理效率降低。本產品根據包涵體中的重組蛋白質已經完成了部分折疊這一實事設計。

產品特點：
1.一站式，提供包涵體洗滌、溶解和蛋白質復性的所有試劑。
2. 采用溫和法溶解包涵體，釋放的包涵體蛋白質不徹底變性，還能保持其部分折疊的結構，使后續的復性處理效率提高。
3. 所用復性液基于稀釋復性，經過精心優化，有利于大部分蛋白的復性。
4.還提供五種不同的添加劑，它們可以單獨加入復性液，也可以按一定比例進行自由組合，以適應不同的蛋白質折疊需求。
5. 本試劑盒提供實惠的小規格，用于做預實驗用，用戶如果選擇到合適的溶液組合后，可以單獨購買其中的溶液以用于大量制備。
6. 本試劑盒足夠100次小規模(1mL規模)的蛋白質復性實驗。

試劑盒組成：

成分	規格
包涵體洗滌液	250mL
包涵體溫和溶解液(10種各一套)	10×10ml
包涵體蛋白質復性液	250ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

自備試劑：去離子水、BCA蛋白濃度測定試劑盒、0.22μm注射器式濾膜。

使用方法：

一、洗滌包涵體
 說明：用常規方法得到的包涵體常常含有去污劑和細胞碎片，因此需要經過充分的洗滌才能用于本實驗。
1．將10mg包涵體沉淀溶解在5mL包涵體洗滌液中，超聲波處理8次或充分吹打混勻。可以適當留取10-30μL作為SDS-PAGE電泳樣品待用。
2．4℃ 12000rpm離心20分鐘后棄上清。
3．重復上面的洗滌步驟3次，每次留取10-30μL作為SDS-PAGE電泳樣品待用。
4．將包涵體沉淀溶解在1mL包涵體洗滌液中，超聲波處理8次或充分吹打混勻。
5．檢查包涵體的純度：將上步得到的包涵體溶液和前幾步得到的預留樣品一起用于SDS-PAGE電泳，檢查每次洗滌去除雜帶的情況。
6．檢查包涵體的濃度：用自備的BCA蛋白檢測試劑盒測試第4步得到的包涵體溶液的蛋白質濃度。
7．將第4步得到的包涵體溶液的蛋白質濃度調到5-10mg/mL(如果低于此范圍，則離心后用適量的洗滌液再溶解；如果高于此范圍，則用洗滌液稀釋)，然后均分到10個1.5mL塑料離心管中，每管100μl。
8．4℃ 12000rpm離心20分鐘后棄上清。
9．所得沉淀即純化的待用的包涵體。

二、確定溶解包涵體的zuì佳條件
1．標記上步得到的10個離心管，并分別加入10種包涵體溫和溶解液，每種1mL。注意：準確記錄它們的對應關系。
2．充分振蕩后，室溫放置30分鐘。
3．450nm檢測渾濁度并記錄下數據。
4．4℃ 12000rpm離心10分鐘后收集上清，此即包涵體溶解液。
5．用0.22μm注射器式濾膜過濾包涵體溶解液。
6．280nm檢測包涵體溶解液的光吸收。
7．溶解液溶解包涵體能力跟包涵體溶液濁度跟成反比，跟包涵體溶解液中OD280數值成正比。根據上面的數據即可確定哪種溶解液對實驗中所用包涵體具有zuì佳溶解能力，并將在此溶解液中溶解的包涵體溶解液用于下面的復性實驗。大量處理需要從本公司單獨大量訂購包涵體溫和型溶解液10種中的1種。

三、包涵體蛋白的復性
1．在2.5mL 4℃預冷的、處于輕柔攪拌中的復性緩沖液中，逐滴加入上步得到的包涵體溶解液。
2．待所有包涵體溶解液都加完后，將包涵體蛋白復性溶液用孔徑為0.22μm注射器式濾膜過濾，除去包涵體(直徑一般在0.5-0.8μm)和大的聚合物。
3．將得到的溶液用于活性檢測或離子交換柱層析和分子篩層析。

根據您的關注的包涵體蛋白溶解及復性套裝，您可能還對以下產品有需求：



名稱：3mL親和層析柱
貨號：BTN140650
規格：3mL
本產品適用范圍廣泛，可用于純化分離重組蛋白、抗體和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA結合蛋白等生物大分子；還可以用于去除生物樣品中的內毒素等污染。

親和層析是利用生物分子間所具有的專一親和力而發明的純化技術。它是利用生物分子間存在的特異性相互作用(如抗原－抗體、酶－底物或抑制劑、激素－受體等)，通過將具有親和力的兩個分子中的一個固定在不溶性基質上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個分子進行分離純化。

親和層析柱常見的使用方法有重力法、手動加壓法、蠕動泵法，其示意圖如下：


儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

常用親和標簽及純化方案：


名稱：Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)
貨號：YT040
規格：100ml
本品是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液裂解的細胞，可 以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)，免疫共沉淀(co-IP)，以及許多兼容1% Triton X-100的酶活性或者生物小分子的檢測。使用本裂解液時，用戶可以根據具體用途自行添加特定抑制劑或者不添加抑制劑。

Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)的主要成分為20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，不含蛋白酶、磷酸酯酶等抑制劑可以有效維持原有的蛋白間相互作用。

使用本裂解液獲得的蛋白樣品，如果用于酶活性檢測或一些生物小分子的檢測，需要測試標準品用本裂解液稀釋后是否會顯著影響標準曲線。如果本裂解液對于標準曲線無顯著影響，則可以使用本裂解液。

用Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)裂解得到的蛋白樣品，可以用百奧萊博的BCA蛋白濃度測定試劑盒(YT036，YT037)測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

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