His標簽蛋白純化試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本品質量穩定，價位合理，需要His標簽蛋白純化試劑盒等蛋白質研究產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括His標簽蛋白純化試劑盒(可溶性蛋白)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：His標簽蛋白純化試劑盒(可溶性蛋白)
英文名稱：His-Tagged Protein Purification Kit(Soluble Protein)
產品貨號：WE0267
產品規格：5ml

  本試劑盒包含Ni-Agarose填料、親和柱空柱以及可溶性His融合蛋白純化所需的全部試劑(細菌裂解液、蛋白酶抑制劑混合物、結合緩沖液和洗脫緩沖液組分)，使用方便。該鎳柱純化系統對6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力，能夠一步純化帶有6個組氨酸親和標簽的蛋白。該系統具有4個Ni2+螯合位點，較只有3個螯合位點的Ni-IDA結合Ni2+更為牢固，有效防止純化過程中Ni2+脫落且增強對His標簽蛋白的結合能力，提高純化效率。較高的基團密度，大大提高了蛋白載量。該系統在天然或變性條件下，對來源于各種表達系統(如桿狀病毒，哺乳細胞，酵母以及細菌)中的His標簽蛋白，均有很好的純化效果。本產品已螯合鎳離子，可直接用可溶性蛋白的純化，使用方便，快捷。

鎳柱參數：
支持物：CL-6B瓊脂糖凝膠
載量：20-30 mg His標簽蛋白/ml填料
粒徑：50-160μM

試劑盒組成：

組份	5ml
Ni-Agarose Resin	5ml
Bacterial Protein Extraction Reagent	65ml
1 M Tris-HCl(pH7.9)	15ml
1 M Imidazole	65ml
3 M NaCl	120ml
Protease Inhibitor Cocktail	700μl
吸附柱(12ml)	一套

保存條件：Protease Inhibitor Cocktail，-20℃；Ni-Agarose Resin，2～8℃，避免冷凍；其它組分，2～8℃

注意事項：
1、在純化之前采用電泳檢測蛋白的可溶性，本試劑盒只適合于可溶性蛋白的純化，如需純化包涵體蛋白，請選擇我公司的包涵體蛋白純化試劑盒，貨號為WE0266。
2、緩沖液中不建議使用 β-巰基乙醇、DTT和EDTA。
3、整個純化過程中切忌凝膠脫水變干。
4、為提高純化效率，先確定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的zuì佳使用濃度。必要時可以使用線性或梯度濃度的咪唑濃度，Binding Buffer的范圍為0-10 mM，洗脫緩沖液的范圍為10-500 mM來進行。并通過SDS-PAGE或Western Blotting來檢測目的蛋白的純度。
5、請使用高純度的試劑配制緩沖液，并通過0.22μM或者0.45μM過濾器過濾。為避免柱子被堵塞，建議將裂解液進行離心，或者使用0.22μM或者0.45μM過濾器過濾。
6、柱再生時，保證每步洗完后都要用足夠的去離子水沖洗至中性。

使用方法：

I 緩沖液的準備
可溶性蛋白純化緩沖液配方：

組份	Tris-HCl(pH7.9)	Imidazole	NaCl
Soluble Binding Buffer	20 mM	10 mM	0.5 M
Soluble Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M

II 組裝層析柱
1、將Ni-Agarose Resin填料混勻后加入層析柱，室溫靜置10分鐘，待凝膠與溶液分層后，把底部的出液口打開，讓乙醇通過重力作用緩慢流出。
注意：
1)填料的上層是乙醇保護層，將填料和乙醇一起混勻，以每ml填料純化20-30mg His標簽蛋白計算，取需要的填料與乙醇的混合液加入層析柱。
2)如果乙醇不流出，可以給柱子一個外力，例如用大拇指對柱口輕輕按壓一下，迫使乙醇流出。
3)本實驗都是通過重力作用使溶液流出。
2、向裝填好的柱中加入5倍柱體積的去離子水將乙醇沖洗干凈后，再用10倍柱體積的Binding Buffer平衡柱子，平衡結束后即可上樣。
注意：柱體積指的是填料的體積。

III 可溶性蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入1-5ml細菌裂解液(每1ml 細菌抽提試劑中已加入10μl 蛋白酶抑制劑混合物)，超聲裂解菌體。
注意：
1)當提取物粘度高或提取蛋白為包涵體時，建議加入DNase I和Lysozyme。每1ml 細菌抽提試劑中加入1μl DNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可單獨從我公司購買，貨號：Lysozyme(#WE0214)、 DNase I(#WE0213A)，如使用其它公司產品，請按照相應說明書操作。
2)超聲過程中保持菌液處于冰浴中，超聲條件依賴于所使用的超聲儀功率，探頭種類，容器的大小形狀，需實驗中自己摸索，應避免連續超聲導致的大量產熱，可分成短時間，多次超聲，通過一定的間隔時間避免溶液過熱。zuì終菌液變清即可。
2、10000 rpm,4℃離心3分鐘，收集上清中的可溶性蛋白。
3、用Binding Buffer將菌體裂解液等倍稀釋后負載上柱，流速為10倍柱體積/小時，收集流穿液。
注意：
1)本試劑盒中附帶有一塊篩板，使用時先將篩板加至填料的上層，該篩板可用于雜質較多的蛋白的過濾，防止過多的雜蛋白堵塞柱子的作用。再將處理好的樣品負載上柱，但是篩板放入柱子后就不易取出。
2)通過控制加入的菌體裂解液的速度來控制流速。
4、使用15倍柱體積的Soluble Binding Buffer沖洗柱子，洗去雜蛋白。
5、使用適量Soluble Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
注意：洗脫峰可以分管收集，每1ml收集1管，并采用蛋白監測儀監測，收集洗脫峰。
6、洗脫后，依次使用10倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。
注意：如果是分段梯度洗脫，zuì大洗脫緩沖液中咪唑濃度未達到500 mM時，則使用濃度為500 mM的咪唑進行洗脫10倍柱體積后，再進行第6步的操作。

Ⅳ 柱再生
當填料使用多次后，結合效率會有所下降(表現為流速變慢或填料失去藍綠色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用壽命和蛋白質的結合效率。
1、使用2倍柱體積的6 M鹽酸胍沖洗后，使用3倍柱體積的去離子水沖洗。
2、使用1倍柱體積的2% SDS沖洗。
3、依次使用1倍柱體積的25%、50%、75%和5倍柱體積的乙醇沖洗，再依次使用1倍柱體積的75%、50%和25%的乙醇沖洗。
4、使用1倍柱體積的去離子水沖洗。
5、使用5倍柱體積含50 mM EDTA緩沖液(PH8.0)沖洗。
6、使用3倍柱體積去離子水，3倍柱體積20%乙醇沖洗。
7、2～8℃保存。
8、再次使用前，需先使用10倍柱體積去離子水沖洗，然后使用5個柱體積的50 mM NiSO4再生，3個柱體積的Binding Buffer平衡。

儲存條件：-20℃

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名稱：組織培養專用蛋白酶抑制劑
貨號：BTN130531
規格：1mL
本產品就是混合各種蛋白酶抑制劑而得的200×濃縮液，溶劑為DMSO。組織培養時，各種分泌蛋白會不同程度的被各種外源和內源性蛋白酶降解。為防止分泌蛋白的降解，需要在培養基中添加各種蛋白酶抑制劑。

產品特點：
1. 即開即用，不需要單獨購買每個成分再配制。
2. 抑制譜廣，由多種蛋白酶抑制劑組成，能特異性抑制絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天門冬氨酸蛋白酶及氨基肽酶等各種蛋白酶活性。
3. 它可以與各種組織培養基兼容，在培養基中加入1/200體積即可。

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存、有效期兩年。

名稱：一站式Tricine-SDS-PAGE套裝
貨號：BTN81205
規格：30次

名稱：乙烯乙二醇
貨號：BTN131118
規格：200mL
乙烯乙二醇為比甘油更穩定的穩定劑。


產品特點：
1．特異性的純化，能夠去除醛類、過氧化物、鐵及具有紫外吸收的烴類。
2．適于儲存酶而不會損失活性。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。


名稱：細胞線粒體純化試劑盒
貨號：YT043
規格：50-100次
本試劑盒用于快速便捷分離培養細胞線粒體，在分離線粒體的同時可以獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，可用于研究細胞色素c等線粒體蛋白向胞漿的釋放。

使用本試劑盒分離獲得的線粒體純度較高，并且大部分分離獲得的線粒體都含有完整的內膜和外膜，并具有線粒體的生理功能。因此本試劑盒分離得到的線粒體可以用于線粒體的生理功能等方面的研究。例如可以使用百奧萊博的YT148線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)測定分離得到的線粒體的膜電位。

本試劑盒分離得到的線粒體也可以被試劑盒中的線粒體裂解液或其它適當裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。

本試劑盒提供了線粒體制備過程中勻漿程度的重要判斷指標，即臺盼藍染色，使分離得到的線粒體的質量更加有保證。臺盼藍染色液為選用試劑，在實驗條件成熟后可以不必使用。

本試劑盒提供了蛋白酶抑制劑PMSF，使勻漿時蛋白酶的活性被適當抑制，這樣在獲得線粒體的同時還可以獲得有時有用的去除了大量線粒體的蛋白，在進行蛋白或酶活分析時可以作為對照。如果每個樣品的細胞數量為2000-5000萬，本試劑盒可以處理50-100個樣品。

試劑盒組份：
線粒體分離試劑———125ml
臺盼藍染色液————10ml
線粒體儲存液————15ml
線粒體裂解液————15ml
PMSF(晶體)—————可配制1.5ml 100mM PMSF
PMSF(溶劑)—————1.5ml

注意事項：
1. 試劑盒中的試劑對于不同的實驗目的不必全部使用。
2. 如果不是用于制備線粒體蛋白樣品，線粒體分離試劑和線粒體裂解液中不必加入PMSF。
3. 如果用于制備線粒體蛋白樣品，線粒體分離試劑和線粒體裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在線粒體分離試劑或線粒體裂解液加入到樣品中前2-3分鐘內加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
4. 分離線粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進行，所用溶液需冰浴或4℃預冷。
5. 通常在分離線粒體時前后兩次離心速度選取600g和11,000g，如果希望純度更高，但對線粒體的得率要求不高，前后兩次離心速度可以采用1000g和3500g。
6. 臺盼藍與PMSF對人體有毒，請注意小心防護。

儲存條件：-20℃，有效期一年。


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KFS045	DyLight405標記抗兔免疫熒光染色試劑盒	300T

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