KFS238 p27蛋白檢測試劑盒

產品簡介
p27蛋白檢測試劑盒由專業試劑供應商北京百奧萊博提供,用于科研目的,我公司的p27蛋白檢測試劑盒品質上佳,經過多年的開發生產,已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括p27蛋白檢測試劑盒在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:p27蛋白檢測試劑盒
英文名稱:p27 Detection Assay(Western Blot)
產品貨號:KFS238
產品規格:50T
本試劑盒用于從哺乳動物組織和培養細胞中提取全蛋白, 用含有蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液LysisBuffer 勻漿裂解組織或細胞,作用溫和,提取過程簡便。獲得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后續研究(本試劑盒包含兔抗p27抗體),但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究,因本試劑盒中包括這兩種酶的抑制劑。
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名稱:蛋白銀染試劑盒
貨號:WE0281
規格:20次
本試劑盒采用高靈敏度的銀染染料,可應用于變性膠及非變性膠的蛋白染色,具有目的條帶清晰、背景低,操作時間可靈活控制的優點。另外,本試劑盒增加了一步短時敏化作用步驟,可明顯降低背景及提升目的條帶的亮度。
試劑盒組成:
| 組份 | 20次 |
| Silver Stain Sensitizer(500×) | 2×1ml |
| Silver Stain Enhancer | 3ml |
| Silver Stain | 2×250ml |
| Silver Stain Developer | 4×125ml |
注意事項:
1、請提前準備50ml固定液(超純水:乙醇:冰醋酸=6:3:1)、50ml洗脫液(10%乙醇)和50ml終止液(5%的冰醋酸)。
2、操作時請使用去離子水和潔凈的玻璃或塑料器皿,須戴一次性手套進行操作。
3、整個銀染過程需在搖床上進行,搖床轉速約60 rpm左右。
4、需自備乙醇,冰醋酸。
操作步驟:
以下操作步驟中各溶液的用量以大小為8.5×5.5 cm、厚度為1.0 mm的凝膠為例,以凝膠全部浸沒到溶液為準,置于搖床上操作,一般用量25ml。對于大型凝膠,各溶液的使用量需按凝膠體積的比列放大。
請提前準備好50ml固定液(超純水:乙醇:冰醋酸=6:3:1)、50ml洗脫液(10%乙醇)和50ml終止液(5%的冰醋酸)。
1、水洗:電泳完成后,用超純水洗膠2次,每次洗滌5分鐘。
2、固定:用25ml固定液固定凝膠2次,每次固定15分鐘。
3、洗脫:用洗脫液洗膠2次,每次洗滌5分鐘。
4、水洗:用超純水洗膠2次,每次洗滌5分鐘。
5、增敏:將上一步洗好的凝膠置于銀染增敏工作液中,室溫下準確孵育1分鐘后用超純水洗膠3次,每次洗滌20秒。
銀染增敏工作液的配制:取50μl Silver Stain Sensitizer(500×)加入到25ml超純水中,混勻。
6、銀染:棄去超純水,將凝膠置于銀染工作液中孵育30分鐘。
銀染工作液的配制:取25ml Silver Stain加入50μl Silver Stain Enhancer混勻。
7、水洗:用超純水快速洗膠2次,每次洗滌準確控制為20秒。
8、顯影:立即將洗好的凝膠浸沒在顯影液中,室溫孵育2-3分鐘,直至蛋白條帶顯示清晰。
顯影液的配制:取25ml Silver Stain Developer加入30μl Silver Stain Enhancer混勻。
注意:顯影30秒內,蛋白條帶開始顯現,繼續顯影至2-3分鐘。若蛋白條帶顯色較淺,可適當延長顯影時間至5分鐘及以上。
9、終止:用終止液洗去凝膠上的顯影液后,將凝膠浸泡在新的終止液中反應10分鐘。
實驗圖例

BSA蛋白樣品經過10%的SDS-PAGE凝膠電泳后銀染結果
BSA蛋白分子量約為66 kD,上樣量從左到右分別為50ng,10ng,5ng
儲存條件:室溫。

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