我公司致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白，包括哺乳動物細(xì)胞蛋白抽提試劑在內(nèi)的各類受體、細(xì)胞因子、生長因子、轉(zhuǎn)錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特別提示：包括哺乳動物細(xì)胞蛋白抽提試劑在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：哺乳動物細(xì)胞蛋白抽提試劑
產(chǎn)品貨號：JN0189
產(chǎn)品規(guī)格：100ml|500ml

  哺乳動物細(xì)胞總蛋白抽提試劑是一種采用溫和表面活性劑的細(xì)胞裂解試劑，該試劑在低濃度即能溶解細(xì)胞膜，不會引起蛋白質(zhì)變性，抽提的蛋白可用于進(jìn)一步的分析檢測實驗或下游的分離純化。利用本產(chǎn)品抽提效率高，得到的蛋白量高于反復(fù)凍融法或者超聲法。本產(chǎn)品對懸浮或貼壁生長的細(xì)胞都有很高的抽提效率，無需將貼壁細(xì)胞進(jìn)行消化收集。

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名稱：石蠟包埋組織蛋白提取試劑盒
貨號：BTN130888
規(guī)格：50次
石蠟包埋組織是很重要的臨床材料，研究其正常細(xì)胞和疾病相關(guān)的細(xì)胞，特別是癌細(xì)胞中標(biāo)記蛋白的差異表達(dá)水平，對于判斷癌化的進(jìn)展，癌癥的類型的判定，以方便于診斷和治療有重要的意義，然而體外培養(yǎng)的細(xì)胞的蛋白差異表達(dá)水平并不能夠真實反映體內(nèi)細(xì)胞的真實狀況，因此從石蠟包埋組織中提取蛋白并且加以研究有很重要的意義，本試劑盒通過特殊的快速脫蠟試劑和蛋白質(zhì)抽提試劑，在兩種不同的溫度條件下溫育，可以將被鉸鏈的蛋白質(zhì)釋放出來，經(jīng)過簡單的離心步驟，上清中含有的蛋白經(jīng)過沉淀洗滌和溶解后，可以用于Western Blot 、SDS-PAGE、ELISA、2D電泳或蛋白質(zhì)芯片分析等，本試劑盒可以使用50次左右。

產(chǎn)品特點：
1. 不含有去污試劑，適用于非染色的標(biāo)本。
2.可以適用于甲醛浸泡的組織標(biāo)本。
3. 不需要超速離心，可以同時處理多個標(biāo)本。

試劑盒組成：

成份	規(guī)格
預(yù)處理試劑A	100mL
預(yù)處理試劑B	5mL
提取試劑	5mL
沉淀試劑	75mL
DTT干粉	80mg
使用手冊	1份

儲存條件：常溫下運輸和保存，但DTT和提取試劑需要4℃保存，盛裝預(yù)處理試劑A的瓶子已經(jīng)密封，請在使用后，將剩余的預(yù)處理試劑A倒入一個有內(nèi)蓋的瓶中，同時蓋緊內(nèi)外蓋，以防止揮發(fā)。盛裝預(yù)處理試劑A，B和沉淀試劑的瓶蓋要蓋緊，同時避免火源。

使用方法：
1. 取兩塊大約10-15μm厚，100mm2石蠟包埋組織切片到1.5mL的干凈離心管中，加入1mL預(yù)處理試劑A，高速渦懸震蕩30 sec，室溫靜置5 min，期間偶爾顛倒離心管數(shù)次。
2. 加入100μL預(yù)處理試劑B，渦懸震蕩10sec，再10000rpm(10000g)離心2min，移去上下兩層的液體。
3. 用500μL的超純水清洗脫蠟的組織兩次，離心并盡量吸去液體，保留組織塊沉淀。
4. 加入100μL提取試劑(用前需要將DTT全部加入到裝提取試劑的瓶中，搖晃混勻，未用完的提取試劑需要4℃放置)，蓋上蓋子，渦懸震蕩數(shù)秒。
5.在水浴鍋中100℃加熱20 min，短暫離心一下，再用組織研磨棒將切片組織磨碎。
6.在水浴鍋中60℃加熱2 hour，期間大約每20 min取出，震蕩一次。
7. 4℃，12000rpm(12830 g)離心15 min，小心將上清轉(zhuǎn)移到一個新的1.5mL的干凈離心管中。注意：在上清中的蛋白質(zhì)可以在4℃的環(huán)境條件下保存一個星期，如果需要長期保存，請放置在-20℃的環(huán)境中，同時避免 反復(fù)凍溶，也可以使用我公司生產(chǎn)的非干擾型蛋白濃度測定試劑盒對上清中的蛋白質(zhì)直接定量。
8. 加入1mL的沉淀試劑，渦懸震蕩10 sec，在4℃的環(huán)境中保持10 min。
9. 4℃，12000rpm離心15 min，去除上清，保留沉淀。
10. 加入0.5mL的沉淀試劑，渦懸震蕩10 sec，在4℃的環(huán)境中保持10 min，再4℃，12000rpm離心15 min，去除上清，保留沉淀，在通風(fēng)櫥中將試管倒置在濾紙上，讓殘余的液體揮發(fā)干凈。
11. 將固體沉淀溶解于合適的自備的緩沖液中，再4℃，12000rpm離心5 min，收集上清，用于SDS-PAGE，Western blot等實驗。注意：此上清中含有DNA，RNA 殘留，所以溶液有些發(fā)粘，加入少量的micrococcal nuclease，benzonase等消化，有助于減少粘性，但是即使不處理一般不會影響后續(xù)實驗，用槍頭將沉淀搗碎。建議使用含有Thiourea ，Urea，NDSB-201或其它強(qiáng)溶解能力的去污試劑的緩沖液有利于沉淀的完全溶解。

注意事項：
1. 為提高石蠟包埋組織中蛋白質(zhì)的回收效率，必須盡量減少在切片制作過程中甲醛固定時間，同時在石蠟包埋前徹底脫水，甲醛固定的時間越長，蛋白質(zhì)的提取回收效率越低。
2. 盡量取用從石蠟包埋組織塊中切取的薄片，或沒有封閉到載玻片上的沒有經(jīng)過蘇木精等染色的切片。
3. 材料越新鮮或甲醛固定時間越短，蛋白質(zhì)的回收效率越高。
4. 提取試劑中含有含有刺激性的化合物，操作時要戴好乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，防止吸入口鼻，沾染皮膚 眼睛后，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫(yī)生的幫助。
5. 對于甲醛浸泡的組織樣本，每次可以取5-10mg的組織樣本，用雙蒸水洗滌離心收集后后，直接從步驟4開始操作。
6. 提取的蛋白沉淀如果用于ELISA、RIA等免疫實驗，可能需要行抗原修復(fù)程序，但是如果用Western Blot或Dot blot實驗，一般情況下沒有必要。
7. 本試劑盒只能夠用于體外實驗，不能夠用于臨床、治療和動物體內(nèi)實驗等，由此產(chǎn)生的后果概不承擔(dān)責(zé)任。

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