北京百奧萊博供應的臺盼藍染色液(0.4%)用于科研目的，臺盼藍染色液(0.4%)是我司眾多優質細胞凋亡與增殖之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括臺盼藍染色液(0.4%)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：臺盼藍染色液(0.4%)
英文名稱：0.4% Typan Blue Solution
產品貨號：SY0507
產品規格：20ml|100ml

臺盼藍（Trypan Blue），一種偶氮、親水性酸性藍色染料，可透過死亡細胞和垂死細胞的細胞膜，將其染成藍色，而活細胞由于其細胞膜的完整性，可將臺盼藍排斥在外，因此，通過顏色的變化即可將活細胞（活細胞呈透明無色）和死細胞鑒別開來，基于此原理，本品廣泛用于細胞活性水平的常規評估。臺盼藍還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺盼藍與蛋白結合形成的復合物可發出紅色熒光。另外，臺盼藍（合適濃度）還常用來淬滅細胞表面的自熒光或者其他熒光信號。

本品為溶于生理鹽溶液的0.4%（w/v）臺盼藍染色液，以無菌形式提供，細胞培養級別。

使用方法

1）對于懸浮細胞，離心收集細胞，充分清洗后，用適當緩沖液如PBS，HBSS重懸制成單細胞懸液；對于貼壁細胞，先用胰酶消化細胞，再按照懸浮細胞的方法制備單細胞懸液。
2）取0.5ml單細胞懸液，按照1:1比例與0.5ml 0.4%臺盼藍染色液充分混勻，室溫染色3~10min。
【注1】：因臺盼藍具有細胞毒性，染色時間過久會導致部分死細胞染色，干擾計數。
【注2】：若細胞密度比較高，可取0.2ml單細胞懸液，經適當緩沖液稀釋到0.5ml，之后再用0.5ml 0.4%臺盼藍染色液染色。
3）取少量上述染色細胞加入血細胞計數板，于顯微鏡低倍鏡下計數，分別計算著色細胞（即損傷細胞和死細胞）和總細胞。
【注1】：用移液槍加染色細胞時，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其完全覆蓋住整個小室。不可過量加液或者不足量。
【注2】：1mm2方格內細胞數通常控制在20-50 cells，當細胞數超過200個，需重新調整稀釋倍數。
4）按照以下公式來計算細胞數目和活細胞百分比，
a，計算每ml細胞數目：Cells/ml=1mm2大方格內的平均細胞數×稀釋倍數×104；【注】：此時的稀釋倍數為：步驟2所取的單細胞懸液與臺盼藍染色液混合后的稀釋倍數
b，總細胞數目：Total cells=（Cells/ml）×zuì初制備單細胞懸液的總體積
c，細胞活力值：Viability（%）=（總細胞數-總著色細胞數）/總細胞數×100
【注】：通常情況，健康的對數期培養細胞，活細胞至少占到95%。

儲存條件：室溫，有效期2年

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名稱：MTT檢測試劑盒
貨號：BTN111105
規格：500次
MTT廣泛用于檢測細胞生長，其原理是MTT可以被活細胞線粒體內的脫氫酶還原生成深紫色的formazan結晶，而死細胞則無此活性。深紫色的formazan結晶被溶解后可以通過測定490nm波長的光吸收而測定出其濃度，并由此推測出細胞的活力，細胞增殖越旺盛，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。其原理如下：


產品特點：
1．采用獨特的Formazan溶解液，可以充分溶解formazan，減少誤差。
2．背景低，靈敏度高，線性范圍寬，重復性好。
3．本產品為足夠500次(5個96孔細胞培養板)微孔板檢測。
4．可用于生物活性因子活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗、腫瘤放射敏感性測定等。

試劑盒組成：

成分	規格
溶液A	5ml
溶液B	50ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存(但溶液B也可以常溫運輸和保存)，有效期一年。

使用方法：
下面操作是檢測細胞毒性的試驗，其他應用跟此類似或更簡單(如生長曲線試驗)，操作步驟可以以此為基礎稍作修改即可，故不再贅述。

㈠、接種細胞
1．按常規胰酶消化法消化匯合的單層細胞，收集到含血清的培養基中。
2．200g離心5分鐘收集細胞沉淀。
3．用培養基重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸浮液并計數。
4．將細胞稀釋到2.5×103個/mL～5×10個/mL之間(需要根據細胞的生長速度決定)，如果不知道生長數度，一般可以稀釋到1×10個/mL。
5．將足夠量的細胞懸液轉移到培養皿中(便于用排槍取樣)。一個96孔板的MTT檢測需要約20mL的細胞懸液。
6．用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細胞懸液(對正常細胞)。如果是腫瘤細胞，則加入100μL腫瘤細胞懸液和100μL培養基(總體積為200μL)。注意：一定要把細胞加在孔的正中，否則細胞會聚集在孔的角落處，影響試驗。
7．用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細胞懸液等體積的培養基。第1 列各孔將作為+培養基-細胞+MTT對照(用于測OD時調零)，第12列加培養基的作用是減少邊緣效應對第11 列反應的影響。
8．按常規細胞培養方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天，使細胞進入指數生長期。

㈡、藥物處理
9．用培養基將藥物稀釋到8個待測濃度(如果不知道待測濃度，則需要預試驗確定)，一般一種藥物需要做3塊平行板。
10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培養基(不要觸動細胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培養基。
11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鮮培養基，這些孔將作為+培養基+細胞-藥物的對照。
12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8個濃度梯度的待測藥物，每列加入一個濃度的藥物。
13．按常規方法把96孔板繼續放在在37℃和5% CO2條件下孵育一定的時間，此段時間即為藥物處理細胞的時間，由用戶自己決定。
14．處理結束后去除第2 到第11列(共10列，均含細胞)所有孔中的培養基，并再加入100μL新鮮培養基。
15．每天換培養使細胞數量擴增2-3倍(所需時間隨細胞不同而不同)。

㈢、存活細胞計數
16．在生長末期，去除第1到第11列各孔中的培養基后，再加入100μL新鮮培養基和10μL溶液A(含MTT成分)，用錫箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2條件下繼續培養4-8小時。注意：溶液A在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴至全部溶解，搖勻后使用。MTT有致癌性，一定要帶手套操作。
17．小心吸棄孔內培養基(含溶液A)。由于培養基可能會影響光吸收，zuì好盡可能去除。
18．每孔加入100μL溶液B，置搖床上低速振蕩10分鐘，使MTT形成的formazan結晶物充分溶解。
19．由于產物不穩定，故需要立即在酶聯免疫檢測儀上選擇490nm測定吸光度。
 注意：用第1 列各孔(+培養基-細胞+MTT對照)調零。
20．計數同樣處理的各次重復的平均值。
21．以藥物濃度為橫軸，以吸光度為縱軸繪制曲線。由于各處理吸光度值差別很大，一般需將其轉化成生長抑制率(以不加藥物的第2和第11列各孔數據的平均數作為)，這樣便于計算出IC50，用于各種藥物處理效果的比較。注意：如果測生長曲線，則以時間為橫軸。正常生長曲線一般呈現S型，具有促進作用的則斜率加大。

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貨號	名稱	規格
BTN140634	MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒	500次
YT895	Hoechst 33342染色液	10ml|50ml
SY0474	細胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-Alexa Fluor 488/PI)	20T|50T|100T
SY0477	TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 647)	20T|100T
QN1309	細胞核提取試劑盒	50T|100T
QN1315	細胞凋亡Hoechst 33342/PI雙染試劑盒	100T|500T

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