細胞膜蛋白與細胞漿蛋白提取試劑盒的品牌是百奧萊博，是優質的蛋白質研究產品，本制品用于生化實驗研究等領域，細胞膜蛋白與細胞漿蛋白提取試劑盒是我司眾多優質蛋白質研究之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括細胞膜蛋白與細胞漿蛋白提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：細胞膜蛋白與細胞漿蛋白提取試劑盒
英文名稱：Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit
產品貨號：YT042
產品規格：100次

本試劑盒提供了一種比較簡單、方便地從培養細胞或組織中抽提細胞膜蛋白和細胞漿蛋白的方法。抽提的膜蛋白不僅包括質膜上的膜蛋白，也包括線粒體膜、內質網膜和高爾基體膜等上的膜蛋白。

本試劑盒通過勻漿適度破碎細胞，經低速離心去除細胞核和少數未破碎的細胞產生的沉淀，隨后取上清高速離心獲得細胞膜沉淀和含有細胞漿蛋白的上清，然后通過優化的膜蛋白抽提試劑從沉淀中抽提獲取膜蛋白。約90分鐘即可完成培養細胞或組織的細胞膜蛋白與細胞漿蛋白的分離和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性測定等后續實驗。

膜蛋白抽提試劑中含有蛋白酶抑制劑、磷酸酯酶抑制劑和EDTA等，后續不適合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受這些抑制劑影響的酶的活性測定，但抽提獲得的膜蛋白或細胞漿蛋白適合用于檢測蛋白的磷酸化水平。本試劑盒按照本說明書的操作步驟可以抽提100個細胞或組織樣品。

試劑盒組分：
膜蛋白抽提試劑A————100ml
膜蛋白抽提試劑B————30ml

注意事項
1. 需自備PMSF。PMSF一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3分鐘內加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(YT615)可以向百奧萊博訂購。
2. 使用本試劑盒抽提到的細胞膜蛋白與細胞漿蛋白均可直接用百奧萊博的BCA法蛋白濃度測定試劑盒(YT036、YT037)測定蛋白濃度。抽提獲得的細胞膜蛋白不適合用Bradford法測定蛋白濃度。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

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貨號	名稱	規格
BTN80815	BCA法蛋白定量試劑盒	500次
SNM395	Tris HCl(粉劑)	500g
SNM460	蛋白電泳預制膠(7.5%，10孔/15孔)	10塊/盒
KFS031	即用型免疫組織化學SP試劑盒(Mouse)	300 片
SY0320	10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制劑)	100ml
SY0396	谷胱甘肽高速純化樹脂(用于GST標簽蛋白純化)	10ml|50ml|100ml

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名稱：中等RIPA裂解液
貨號：BTN131007
規格：250mL
RIPA裂解液是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等實驗。本產品裂解強度較強，對膜蛋白、胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白和各種轉錄因子均有很好的效果，本產品含有各種蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制劑，能有效防止各種蛋白酶對目的蛋白的降解。我公司各種RIPA裂解液產品特點見下表：

產品名稱	RIPA裂解液(強)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解強度	強	中	溫和
對膜蛋白的提取	很好	較好	一般
對胞漿蛋白的提取	很好	很好	很好
對核蛋白的提取	很好	較好	較好
胞漿磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
細胞核轉錄因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制劑	是	是	是
含磷酸酯酶抑制劑	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

儲存條件：低溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

對于培養細胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zuì終濃度為1mM。
2. 裂解細胞
2.1 對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。
2.2 對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g離心3～5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。

對于組織樣品：
1. 把組織剪切成細小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zuì終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g離心3～5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注意：RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。

備注：
1.為取得zuì佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可以適當分裝后使用。
2.裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，建議使用BCA蛋白濃度測定試劑盒，不建議使用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

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