SYA144 EB病毒單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介
EB病毒單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供,僅用于生物化學(xué)研究方面,我公司的EB病毒單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒品質(zhì)上佳,經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn),已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示:包括EB病毒單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:EB病毒單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:SYA144
產(chǎn)品規(guī)格:48次/盒
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一、簡介
本試劑盒用一對豬細小病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對豬細小病毒核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
二、原理
該試劑盒適用于檢測帶毒豬血液、分泌物、排泄物以及腎、肺、肝、腦、睪丸、淋巴結(jié)和胎盤等組織標(biāo)本中豬細小病毒(PPV)DNA,用于豬細小病毒(PPV)感染的輔助診斷,其檢測結(jié)果僅供臨床參考。
三、試劑盒組成(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
熒光PCR反應(yīng)液 1管 672μL/管
陰性對照 1管 50μL/管
陽性對照 1管 50μL/管
FD1試劑 1瓶 15mL/瓶
FD2試劑 1管 500μL/管
FD3試劑 1瓶 15mL/瓶
FD4試劑 1瓶 30mL/瓶
FD5試劑 2管 2mL/管
吸附柱及收集管 1包 48套/包
四、儲存條件及有效期
熒光定量PCR試劑盒于-20℃以下保存,有效期為12個月;DNA提取試劑盒于常溫保存,有效期為12個月。1.5mL離心管、移液器、吸頭等請自備。
五、熒光PCR儀器適用范圍:
ABI系列,Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。
六、樣品采集、前處理與DNA提取
6.1 樣品的采集
按照相關(guān)標(biāo)準采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-80℃,但不能超過6個月,標(biāo)本運送應(yīng)采用0℃冰壺。
6.1.1 血清:用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL,注入無菌的干燥玻璃管,室溫(22-25℃)放置30-60min,血標(biāo)本可自發(fā)完成凝集析出血清,或直接使用水平離心機,3000rpm離心5min,吸取上層血清,轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管中備用。
6.1.2 血漿:用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL,注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管,立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次,使抗凝劑與靜脈血充分混勻,5-10min后即可分離出血漿,轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管中備用。
6.1.3 拭子、分泌物等樣品:在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500μL PBS或生理鹽水,劇烈振蕩30s。棉拭子盡量擠出液體轉(zhuǎn)移到無DNA酶污染的離心管中備用。
6.1.4 病灶組織樣品:稱取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理鹽水研磨至無塊狀物,然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中備用。
6.2 DNA提取
6.2.1 在上述樣本中加入300μL FD1試劑和10μL FD2試劑,震蕩混勻;
6.2.2 58℃孵育至完全裂解(樣品不同而異,細菌、液體樣本建議孵育15min,動物細胞、組織和糞便樣本建議孵育15min-1h,樣本裂解越完全,核酸提取效果越好);
6.2.3 12000 rpm離心5min,轉(zhuǎn)移上清于一無菌離心管中;
6.2.4 在2.3的離心管中加入300ul FD3試劑,震蕩混勻;
6.2.5 將全部溶液加入帶膜吸附柱(收集管)中,12000 rpm離心1min,棄去流出液;
6.2.6 加入600ul的FD4試劑,12000 rpm離心1min,棄去流出液;
6.2.7 12000 rpm離心2min,去除殘留液體;
6.2.8 將吸附柱放置于新的無核酸酶的1.5 mL離心管中,在膜中央加入20-50μL FD5試劑,室溫靜置1min,12000rpm離心1min,收集核酸溶液,-20℃保存,若長期保存需放置-80℃冰箱。
注:陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。
七、檢測步驟:
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(PPV-qPCR MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 15μL N×15μL
計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品/陰性質(zhì)控品(NTC)/陽性質(zhì)控品(PPV-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實時熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
八、結(jié)果分析:
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果?;€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
(1) 陰性對照(NTC):不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴增曲線。
(2) 陽性對照(PPV-PTC):均產(chǎn)生擴增曲線。
(3) 以上條件應(yīng)同時滿足,否則,此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(1) 在試驗成立的條件下,Ct值≤35的樣本為陽性,表明豬細小病毒核酸陽性。
(2) Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本,表明豬細小病毒核酸陰性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判為可疑樣品。對于可疑樣品,先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線,則為可疑陽性,否則判為陰性。
(4) 對于可疑陽性樣品,重新抽提核酸,再次進行豬細小病毒qPCR檢測。如果重復(fù)擴增曲線為對數(shù)擴增曲線,判為樣本陽性,表明豬細小病毒核酸陽性;否則判為樣本陰性。
九、注意事項:
(1) 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌,而且必須不含DNA酶。
(3) PCR操作應(yīng)嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等),防止實驗室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。

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