2×Taq Plus PCR M的品牌是百奧萊博，是優質的核酸擴增(PCR)產品，本制品用于科研目的，我公司的2×Taq Plus PCR M品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料)
產品貨號：QN0971
產品規格：1ml|5ml

PCR MasterMix包含三種酶(Taq，Pfu，Taq plus)，每種酶對應著兩種PCR MasterMix(含染料和不含染料)，一共六種PCR MasterMix。

Taq：擴增效率zuì高的耐熱DNA聚合酶，其擴增速度約為1-2kb/min。擴增堿基出錯率為10-5左右。其產物未端帶有A，可直接用于TA克隆。

Pfu：目前保真度zuì高的耐熱DNA聚合酶，堿基出錯率為10-6，但擴增效率低于Taq酶，一般能很好的擴增2kb以下的片段。其擴增速度約為500bp/min左右。其產物為平未端，須加A后才可用于TA克隆。

Taq Plus：Taq和Pfu的等比混合物。集擴增效率高和保真度好于一身。擴增效率比Pfu高，保真度比Taq好。其擴增速度約為1000bp/min左右。其產物未端帶有A，可直接用于TA克隆。

染料PCR MasterMix反應完后可以直接電泳檢測。

別名：2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料)
英文名稱：2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料)
儲存條件：-20
性狀：液體

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名稱：taq酶抗體
貨號：BTN130815
規格：500U
Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗體，其與Taq酶結合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品進行PCR擴增時，高溫變性前抗Taq抗體與Taq酶結合抑制DNA聚合酶活性，能夠在低溫條件下有效抑制引物的非特異性退火及引物二聚體引起的非特異性擴增。抗Taq抗體在PCR反應zuì初的DNA變性步驟中變性，DNA聚合酶活性恢復，達到Hot Start PCR效果。使用本制品無需特殊的抗Taq抗體失活處理，可以在常規PCR反應條件下使用。其工作原理如下：


儲存條件：低溫運輸，-20℃保存、有效期一年。

活性定義：Taq Antibody與Taq DNA Polymerase混合，25℃，10 min溫浴后，在55℃，10 min條件下抑制90％以上的1U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定義為1U。

純度：
1. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA-Hind III在37℃或70℃下反應1小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
2. 10 U的Taq Antibody和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃或70℃下反應1小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
3. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA在37℃或70℃下反應1小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
4. 10 U的Taq Antibody和1μg的16S，23S rRNA在37℃或70℃下反應1小時，RNA的電泳譜帶不發生變化。
5. 35Cycles的PCR反應條件下，無Mouse Genomic DNA的污染。

名稱：T7體外轉錄試劑盒
貨號：BTN91106
規格：50次
本試劑盒是基于T7 RNA聚合酶的RNA體外轉錄試劑盒，它利用含有T7啟動子的模版DNA，以NTP為底物，從T7啟動子下游開始合成與模版DNA中一條鏈互補的RNA，簡單快速獲得大量的RNA分子。

產品特點：
1. 即開即用，用戶只需提供含T7啟動子的DNA模板即可以進行體外轉錄實驗，不需要單獨準備每一個成份。
2. 單溶液預配液，減少加樣次數，避免了操作誤差，增加了可重復性。
3. 模版DNA可以是線性化的質粒DNA，也可以是PCR擴增產物。
4.可以合成的RNA的zuì佳長度在20nt到2000nt之間。
5.產品配方經過精心優化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA 結構研究、核酶生物化學、體外翻譯、RNA-蛋白質相互作用、反義技術、SELEX技術和RNA干擾(RNAi)等實驗。

試劑盒組成：

成分	規格
轉錄預配液(2×)	0.5mL
陽性對照DNA(1.3 Kb片段)	20μL(10ng/μL)
T7 RNA聚合酶	50μL
RNase-free水	1mL
說明書	1份

儲存條件：-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、制備DNA模板(本試劑盒不含所需試劑，此處信息僅供參考)

PCR片段和質粒DNA都可以用作體外轉錄的模板，但是必須注意以下幾點。
1)必須使用線性化的DNA。如果是質粒DNA，則必須先用適當的限制性內切酶切成線狀。
2)是需要轉錄的DNA序列的上游必須有T7啟動子。如果模板是PCR產物，則可以在設計引物時將T7啟動子序列(5′TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3′)加上。如果是將DNA片段克隆到載體上，則需要選擇有T7啟動子的載體，并且克隆位點必須位于T7啟動子一、制備DNA模板(本試劑盒不含所需試劑，此處信息僅供參考)

PCR片段和質粒DNA都可以用作體外轉錄的模板，但是必須注意以下幾點。
1)必須使用線性化的DNA。如果是質粒DNA，則必須先用適當的限制性內切酶切成線狀。
2)需要轉錄的DNA序列的上游必須有T7啟動子。如果模板是PCR產物，則可以在設計引物時將T7啟動子序列(5′TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3′)加上。如果是將DNA片段克隆到載體上，則需要選擇有T7啟動子的載體，并且克隆位點必須位于T7啟動子下游。
3)需要轉錄的DNA序列的下游端zuì好不要是3′突出。如果是3′突出(比如選擇了Pst I來線性化質粒)，則zuì好用T4 DNA聚合酶修平。
4)必須保證DNA模板中沒有RNase。由于提取質粒DNA的過程中一般要使用大量的RNase A，因此質粒DNA一般都有嚴重的RNase A污染，所以在用作模板前，zuì好采取膠回收得方法回收質粒DNA。并且加入少量總RNA一起保溫，然后電泳檢測RNA是否被降解，以此來判斷純化的DNA模板是否有殘留RNase A。

二、體外轉錄反應
1.在一個RNase-free的塑料離心管中，在室溫下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	備注
DNA模板		如果使用質粒DNA,必須反復酚-氯fǎng抽提去除殘留的RNase,然后再乙醇沉淀質粒DNA需室溫時使用
PCR片段	50ng左右
質粒DNA	1μg左右
陽性對照	4μL
轉錄預配液，2×	10μL
T7 RNA聚合酶	1μL
RNase-free水	補水到20μL

注：此為20μL反應體系的用量，對其他反應體系，各成分的用量可以按比例增減。如果需要標記RNA探針，則需要訂購NTP分開的試劑盒。如果需要得到加帽RNA，則需要加入自備的加帽修飾核苷酸。
2. 37℃保溫1-2小時。注意：延長保溫時間并不能提高產量。
3. 70℃加熱10分鐘滅活T7 RNA聚合酶。
4. 取1-3μl電泳檢測轉錄效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

三、去除DNA模板(所需試劑可從本公司另購)
1.在體外轉錄體系中加入1μL自備的RNase-free DNase(3-5U/μL)。
2. 37℃保溫15-30分鐘。
3. 補水到100μL。
4. 用自備的等體積(100μL)的Tris飽和酚-氯fǎng抽提一次去除殘留的DNase和RNA聚合酶。
5. 加自備的200μL微量核酸沉淀劑(用前需要搖晃混勻)，振蕩后15000rpm離心3～5分鐘，棄上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震蕩10秒后15000rpm離心3～5分鐘，棄上清。
7. 短暫離心數秒，用槍頭吸棄上清。
8. 晾干，所得沉淀即體外轉錄所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃長期保存。

疑難解答：
1、沒有RNA產物。zuì常見原因是模板有RNase污染，可用純化的RNA跟模板DNA一起保溫，再檢測RNA是否降解。還可以增加RNase Inhibitor用量，本試劑盒緩沖液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染嚴重，可能需要用戶補加RNase inhibitor。
2、RNA產量低。zuì常見的原因是DNA模板。在轉錄序列的個和第二個堿基zuì好都是G，在前14個堿基內避免有U存在。
3、RNA長度比預期的短。可能是模板序列中有T7 RNA聚合酶的終止序列。可以改用SP6體外轉錄試劑盒(啟動子也必須改成SP6啟動子)。
4、RNA長度比預計的長。T7 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一樣，有不依賴于模板的加尾功能，zuì多有一半的RNA可以帶一個或兩個堿基的尾巴。如果RNA長度比預計的長很多，使用的模板又是質粒DNA，則可能是質粒DNA線性化不徹底。
5、5′單磷酸還是三磷酸。如果使用GTP，則得到的RNA是三磷酸，體外轉錄時如果保溫時間太長(如12小時)，則有50%的三磷酸會變成單磷酸。如果在轉錄體系中加入GMP，則T7 RNA聚合酶將優先使用GMP，所得RNA產物中5′端是單磷酸的比例將大大增加。

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貨號	名稱	規格
BTN130506	PCR級海藻糖溶液	1.5mL
BTN100839	PCR級甲酰胺	250mg
BTN131178	DNA Shuffling試劑盒	10次
YT379	PCR試劑盒(含Taq酶，Buffer，dNTP，上樣液)	400次|2000次
WE0113	BaHF高保真DNA聚合酶	500U|2500U
WE0154	BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)	1ml|5ml

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