Tunel細胞凋亡檢測試劑盒（POD）的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質的細胞凋亡與增殖產品，本制品用于科研目的，本品質量穩(wěn)定，價位合理，需要Tunel細胞凋亡檢測試劑盒（POD）等細胞凋亡與增殖產品的客戶，請到我公司官網聯(lián)系我們。...

特別提示：包括Tunel細胞凋亡檢測試劑盒（POD）在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產品名稱：Tunel細胞凋亡檢測試劑盒（POD）
產品貨號：HQF04
產品規(guī)格：10次/20次/50次

檢測原理：細胞在發(fā)生凋亡時，會在生理生化和細胞形態(tài)上發(fā)生一系列變化，在凋亡中晚期，激活的DNA內切酶會切斷核小體間的基因組DNA，DNA會被降解成為約180bp-200bp的片段，而正常或者增殖細胞很少發(fā)生DNA斷裂。利用這個差異，用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT酶）把Biotin標記的dUTP標記到斷裂DNA片段的3’-OH末端，用POD檢測標記并用底物顯色，然后進行顯微鏡觀察，這個方法被稱為TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法細胞凋亡檢測。
產品和特點：TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒，集成了不同廠家產品的諸多特長，形成獨特和特點：
★ 采用的重組TdT突變體酶活性更高，該轉移酶的比活是其他試劑盒里TdT活力的10倍，同樣情況下，不被標記的3’-OH 末端可以順利標記上Biotin，因此檢測靈敏度更高；
★ 試劑盒對標記反應的底物進行了反復優(yōu)化，采用zuì佳比例的Biotin-dUTP和未標記的dNTP進行3’ -OH末端的核苷酸摻入，使得同一個斷裂的DNA片段末端可以形成更長的“標記尾巴”，該“標記尾巴”一方面減少了相鄰摻入dNTP上Biotin-dUTP基團的空間位阻，同時增加了每個斷裂片段的Biotin基團數(shù)目，從而提高檢測靈敏度，同時減少非特異性反應；
★ 非凋亡細胞由于缺乏大量的3’-OH 末端，不會被顯著摻入和標記Biotin基團；
★ SA-HRP(POD)是采用定點標記技術，不影響SA（鏈親和霉素）與Biotin的結合以及HRP的催化活力；
★ 應用范圍廣，既可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況，也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。
檢測方法：顯微鏡
樣本類型：石蠟包埋組織切片、組織冰凍切片、細胞涂片以及貼壁細胞
儲存條件：試劑盒需儲存在-20℃非無霜冰箱中，避免反復凍融。建議分裝保存Biotin-標記反應混合物。
保存條件：-20°非無霜冰箱，避免反復凍融。建議分裝保存Biotin-標記反應混合物。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN140634	MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒	500次
SNM512	Caspase-6活性檢測試劑盒(分光光度法)	100T|50T|20T
SNM522	DNA ladder檢測試劑盒	100T|50T|20T
SNM530	Annexin V-FITC/PI雙染 細胞凋亡檢測試劑盒	50T|20T|10T
KFS185	Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒	10T|20T|50T|100T
KFS194	Annexin V-kFluor594細胞凋亡檢測試劑盒(熒光顯微鏡專用)	10T|20T|50T|100T

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名稱：MTT檢測試劑盒
貨號：BTN111105
規(guī)格：500次
MTT廣泛用于檢測細胞生長，其原理是MTT可以被活細胞線粒體內的脫氫酶還原生成深紫色的formazan結晶，而死細胞則無此活性。深紫色的formazan結晶被溶解后可以通過測定490nm波長的光吸收而測定出其濃度，并由此推測出細胞的活力，細胞增殖越旺盛，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。其原理如下：


產品特點：
1．采用獨特的Formazan溶解液，可以充分溶解formazan，減少誤差。
2．背景低，靈敏度高，線性范圍寬，重復性好。
3．本產品為足夠500次(5個96孔細胞培養(yǎng)板)微孔板檢測。
4．可用于生物活性因子活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗、腫瘤放射敏感性測定等。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	5ml
溶液B	50ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存(但溶液B也可以常溫運輸和保存)，有效期一年。

使用方法：
下面操作是檢測細胞毒性的試驗，其他應用跟此類似或更簡單(如生長曲線試驗)，操作步驟可以以此為基礎稍作修改即可，故不再贅述。

㈠、接種細胞
1．按常規(guī)胰酶消化法消化匯合的單層細胞，收集到含血清的培養(yǎng)基中。
2．200g離心5分鐘收集細胞沉淀。
3．用培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸浮液并計數(shù)。
4．將細胞稀釋到2.5×103個/mL～5×10個/mL之間(需要根據(jù)細胞的生長速度決定)，如果不知道生長數(shù)度，一般可以稀釋到1×10個/mL。
5．將足夠量的細胞懸液轉移到培養(yǎng)皿中(便于用排槍取樣)。一個96孔板的MTT檢測需要約20mL的細胞懸液。
6．用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細胞懸液(對正常細胞)。如果是腫瘤細胞，則加入100μL腫瘤細胞懸液和100μL培養(yǎng)基(總體積為200μL)。注意：一定要把細胞加在孔的正中，否則細胞會聚集在孔的角落處，影響試驗。
7．用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細胞懸液等體積的培養(yǎng)基。第1 列各孔將作為+培養(yǎng)基-細胞+MTT對照(用于測OD時調零)，第12列加培養(yǎng)基的作用是減少邊緣效應對第11 列反應的影響。
8．按常規(guī)細胞培養(yǎng)方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天，使細胞進入指數(shù)生長期。

㈡、藥物處理
9．用培養(yǎng)基將藥物稀釋到8個待測濃度(如果不知道待測濃度，則需要預試驗確定)，一般一種藥物需要做3塊平行板。
10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培養(yǎng)基(不要觸動細胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培養(yǎng)基。
11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鮮培養(yǎng)基，這些孔將作為+培養(yǎng)基+細胞-藥物的對照。
12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8個濃度梯度的待測藥物，每列加入一個濃度的藥物。
13．按常規(guī)方法把96孔板繼續(xù)放在在37℃和5% CO2條件下孵育一定的時間，此段時間即為藥物處理細胞的時間，由用戶自己決定。
14．處理結束后去除第2 到第11列(共10列，均含細胞)所有孔中的培養(yǎng)基，并再加入100μL新鮮培養(yǎng)基。
15．每天換培養(yǎng)使細胞數(shù)量擴增2-3倍(所需時間隨細胞不同而不同)。

㈢、存活細胞計數(shù)
16．在生長末期，去除第1到第11列各孔中的培養(yǎng)基后，再加入100μL新鮮培養(yǎng)基和10μL溶液A(含MTT成分)，用錫箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)4-8小時。注意：溶液A在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴至全部溶解，搖勻后使用。MTT有致癌性，一定要帶手套操作。
17．小心吸棄孔內培養(yǎng)基(含溶液A)。由于培養(yǎng)基可能會影響光吸收，zuì好盡可能去除。
18．每孔加入100μL溶液B，置搖床上低速振蕩10分鐘，使MTT形成的formazan結晶物充分溶解。
19．由于產物不穩(wěn)定，故需要立即在酶聯(lián)免疫檢測儀上選擇490nm測定吸光度。
 注意：用第1 列各孔(+培養(yǎng)基-細胞+MTT對照)調零。
20．計數(shù)同樣處理的各次重復的平均值。
21．以藥物濃度為橫軸，以吸光度為縱軸繪制曲線。由于各處理吸光度值差別很大，一般需將其轉化成生長抑制率(以不加藥物的第2和第11列各孔數(shù)據(jù)的平均數(shù)作為)，這樣便于計算出IC50，用于各種藥物處理效果的比較。注意：如果測生長曲線，則以時間為橫軸。正常生長曲線一般呈現(xiàn)S型，具有促進作用的則斜率加大。

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