JM110化學感受態細胞由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研目的，我公司的JM110化學感受態細胞品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括JM110化學感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：JM110化學感受態細胞
英文名稱：JM110 Competent cell
產品貨號：RFT114
產品規格：20×100μl

本公司生產的JM1110感受態細胞采用經特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg，-70℃保存幾個月轉化效率不發生改變。

基因型：rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]

產品特點：
1、JM 110 是一種甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，使DNA 不被甲基化，使用其轉化所得到的質粒DNA，可被對dam、dcm 甲基化敏感的限制酶切割。
2、只適用于轉化質粒DNA。
3、細胞具有硫酸鏈霉素(Strr) 抗性。

操作方法：(以下操作均按無菌條件的標準進行)
1、取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100μl感受態細胞為例。
2、向感受態細胞懸液中加入目的DNA(50μl的感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和)，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30分鐘。
3、將離心管置于42℃水浴中放置45秒，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3分鐘，該過程不要搖動離心管。
4、向每個離心管中加入500μl 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養45分鐘(150轉/分鐘)，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5、將離心管內容物混勻，吸取100μl已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養12—16小時。

注意：涂布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多，可取更少量轉化產物涂布平板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200—300μl轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過離心(4000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板)

注意事項：
1. 感受態細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免感受態細胞的轉化效率。
2. 進行轉化操作時，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。
3. 為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到zuì低。

儲存條件：-70℃，有效期6個月。

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名稱：大腸桿菌BL21(DE3)pLysS化學感受態細胞
貨號：BTN90507
規格：0.1mL*10
本產品是大腸桿菌BL21(DE3)plysS菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。使用pUC19質粒檢測本產品，轉化效率可達107。該菌株帶有質粒plysS，具有氯霉素抗性，此質粒含有表達T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG 誘導的表達。本感受態細胞具有氯霉素抗性，適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。
菌株基因型為：F- ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)pLysS Camr

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養基等。

使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μL，根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA 所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB 固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。

注意事項：
1. 涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA 總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA 總量較少，可取200-300μL轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm，2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2. 新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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