BTN140429 大腸桿菌M15化學感受態細胞

產品簡介
北京百奧萊博供應的大腸桿菌M15化學感受態細胞用于科研試驗,我公司專注于克隆與表達產品的研發、生產和供應,為您提供的大腸桿菌M15化學感受態細胞質量可靠,批間差小,且價格公道,熱切盼望您選購我們的產品。...
產品詳細介紹
特別提示:包括大腸桿菌M15化學感受態細胞在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:大腸桿菌M15化學感受態細胞
英文名稱:E.coli M15 Chemical Competent Cell
產品貨號:BTN140429
產品規格:0.1mL*10
本產品是采用大腸桿菌M15菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測,本產品轉化效率可達107。本產品具有卡那霉素抗性。
菌株基因型為:lac ara gal mtl recA+ uvr+ [pREP4 lacI kanaR]。
儲存條件:干冰運輸、-80℃保存,有效期半年。
自備試劑:目的DNA、SOC或LB培養基等。
使用方法:
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μL,可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA 所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm 振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的SOC或LB 固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12-16小時。
注意事項:
1. 涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA 總量較多,可取少量轉化產物涂布平板;若轉化的DNA 總量較少,可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少,可通過離心(4,000rpm,2分鐘)后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2. 新制備的固體培養基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。
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名稱:DNA粘轉平試劑盒
貨號:BTN60107
規格:20次
本產品利用Pfu DNA polymerase所具有3′到5′的聚合酶活性和5′到3′外切酶活性,將3′或5′突出的DNA片段轉化成平末端,用于克隆工作。
產品特點:
1. 簡單,精心優化過的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要單獨準備。
2.適用于任何平末端的DNA載體。
產品組成:
| 成分 | 規格 |
| Pfu DNA Polymerase(3U/μL) | 20μl |
| 2×Polishing Buffer | 0.5ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。
使用方法:
1. DNA片段的準備:
無論是來源Taq,Tth,T7,Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段,還是用限制性內切酶制備的DNA片段,粘轉平之前均需要將DNA沉淀以便去除反應液中的無關成份。沉淀DNA的方法包括經典的鹽/純沉淀法,離心柱DNA 吸附法和百奧萊博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 設置粘轉平(Polishing)反應:
|
在一個干凈的離心管中,分別加入 | |
| 3′或5′突出的DNA片段 | 10-500ng |
| 2×Polishing Buffer | 25μL |
| Pfu DNA polymerase | 1μL |
| 補水到 | 50μL |
| 72℃保溫2小時。 | |
注意:如果不使用熱蓋式PCR 儀器加熱,則需要在反應管中再加入適量液體石蠟以防反應過程中水份蒸發。
3.反應后處理
粘轉平反應后,樣品可以放-20℃長期保存,也可以直接用于T4 DNA連接酶催化的連接反應。對10μL的連接反應體系,一般需要加入1-2μL粘轉平反應液。由于Pfu DNA polymerase在連接反應的溫度條件下幾乎沒有活性,所以不必去除。但文獻報道,去除后連接效率更高。
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