葡聚糖T11(9004-54-0)(BR級，分子量1.1萬)是高品質(zhì)的分離試劑類產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學研究，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多葡聚糖T11(9004-54-0)(BR級，分子量1.1萬)等分離試劑類產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括葡聚糖T11在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：葡聚糖T11
英文名稱：Dextran T11
產(chǎn)品貨號：Y13365
產(chǎn)品規(guī)格：10g

CAS：9004-54-0
分子式：C₆nH₁₀nO₅n
儲存條件：密封陰涼干燥保存
外觀：白色結(jié)晶或粉末
敏感性：易吸潮

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名稱：氯化717陰離子交換樹脂
貨號：QN4048
規(guī)格：500g

名稱：谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠H.P.
貨號：QN4065
規(guī)格：10ml
谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠H.P.用于分離純化谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）標簽蛋白、其它來源的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶以及和谷胱甘肽具有親和作用的蛋白的親和層析介質(zhì)。pGEX載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶融合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。GSTs是一類以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對底物的親和力是亞毫摩爾級的，可以用含游離谷胱甘肽的緩沖液洗脫結(jié)合GST融合蛋白。

產(chǎn)品參數(shù)：
基質(zhì)：6%瓊脂糖凝膠
配基：肝素
顆粒大小：45～165μm
zuì大流速：600cm/h
工作pH：pH3.0～pH12.0
每毫升蛋白結(jié)合量：10mg
操作溫度：室溫
保存條件：貯存于4℃～28℃（保存溶液為20%乙醇）

使用方法：
1．谷胱甘肽樹脂的處理：
① 輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器，將樹脂混成勻漿。
② 取部分勻漿放入15mL聚丙烯管（每100mL細菌培養(yǎng)物大約需要2mL勻漿）。
③ 4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
④ 在樹脂中加入10倍柱床體積預(yù)冷的PBS，顛倒數(shù)次混勻，4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
⑤ 每毫升樹脂加入1毫升冷的PBS，制成50%勻漿，顛倒數(shù)次，混合均勻，懸液冰上放置待用。
2．制備細胞抽提物：
① 每100毫升培養(yǎng)物的細胞沉淀重懸于4mL PBS緩沖液中。
② 加入溶菌酶至終濃度為1mg/mL,冰上放置30分鐘。
③ 用針筒將10mL濃度為0.2%的TritonX-100強行注入黏稠的細胞裂解物中，劇烈振動數(shù)次混勻。加入DNase和RNase至終濃度5μg/mL,4℃振動溫育10分鐘，4℃ 3000 g離心30分鐘，去除不溶性細胞碎片，上清轉(zhuǎn)移到一只新管中，加入DTT至終濃度1mmol/L。
3．純化融合蛋白：
① 細胞裂解物與適量50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和，每100毫升細菌培養(yǎng)物加2mL樹脂，于室溫輕搖30min。
② 混合物于4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
③ 沉淀中加入10倍柱床體積的冷的PBS，顛倒離心管數(shù)次混勻，洗去未與樹脂結(jié)合的蛋白。
④ 4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
⑤ 結(jié)合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫，也可用凝血酶、腸激酶或Xa因子切割，釋放靶蛋白。
4．用谷胱甘肽洗脫融合蛋白：
① 沉淀中加入1倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動10min，洗脫樹脂上結(jié)合的蛋白。
② 4℃以500g離心5分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移至新管中。
③ 重復步驟5和6兩次，合并3次上清。蛋白酶解從結(jié)合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
④ 在結(jié)合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或Xa因子（根據(jù)融合蛋白中的位點選擇），每mL樹脂加入50單位溶于1mLPBS的蛋白酶。顛倒離心管數(shù)次混勻，室溫下振蕩2-16小時。
⑤ 4℃以500g離心5分鐘，上清小心移至新管中。（GST仍結(jié)合在樹脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
⑥ 10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質(zhì)組成。
  試劑配制：谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L還原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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